一种（R）-3-羟基丁酸的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112176003A(43)申请公布日2021.01.05(21)申请号202011056517.4(22)申请日2020.09.30(71)申请人珠海麦得发生物科技股份有限公司地址519000广东省珠海市横琴新区粤澳合作中医药科技产业园豆蔻路36号2栋103室(72)发明人吕金艳司徒卫余柳松(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人尹凡华(51)Int.Cl.C12P7/42(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种（R）-3-羟基丁酸的制备方法(57)摘要本发明属于生物工程领域，公开了一种(R)‑3‑羟基丁酸的制备方法。所述制备方法包括以下步骤：将聚[(R)‑3‑羟基丁酸]粉碎，加入缓冲溶液，然后加入丝氨酸酯酶和金属盐，酶解，灭酶，脱盐，制得(R)‑3‑羟基丁酸；所述金属盐为镁盐或/和锌盐。本申请采用丝氨酸酯酶水解聚[(R)‑3‑羟基丁酸]的方法制备(R)‑3‑羟基丁酸，制备的(R)‑3‑羟基丁酸纯度高，收率高，无重金属残留，且质量稳定；所述制备方法，操作简单，效率高，耗时短，仅在数小时内可以完成一次生产，且生产成本低。CN112176003ACN112176003A权利要求书1/1页1.一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将聚[(R)-3-羟基丁酸]粉碎，加入缓冲溶液，然后加入丝氨酸酯酶和金属盐，酶解，灭酶，脱盐，制得(R)-3-羟基丁酸；所述金属盐为镁盐或/和锌盐。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述丝氨酸酯酶为角质酶，所述角质酶由米曲霉菌发酵制得。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述角质酶的浓度为5-100U/mL；优选的，所述角质酶的浓度为5-20U/mL。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚[(R)-3-羟基丁酸]的黏均分子量范围为50000-300000道尔顿。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述粉碎步骤是将聚[(R)-3-羟基丁酸]于-20至-40℃下，粉碎至粒经为0.1-10微米。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.0-8.5；优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.2-8.0。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述金属盐的添加量为使金属离子的浓度为1-5mg/mL。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述镁盐选自氯化镁或硫酸镁，所述锌盐选自氯化锌或硫酸锌。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为30-50℃，所述酶解的时间为2-10小时；优选的，所述酶解的温度为40-45℃，所述酶解的时间为4-6小时。10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脱盐是采用离子交换树脂进行脱盐。2CN112176003A说明书1/4页一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物工程领域，具体涉及一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法。背景技术[0002]在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸、β-羟基丁酸及丙酮，三者统称为酮体。在饥饿期间，酮体是包括脑在内的许多组织的能量来源，因此具有重要的生理意义。最新的研究表明(R)-3-羟基丁酸对很多疾病具有很好的预防和治疗效果，主要包括认知性能的增强，运动能力的提高，心血管病症的改善，以及糖尿病、神经变性疾病和癫痫的改善等。[0003]目前(R)-3-羟基丁酸的制备方法主要为化学法和生物发酵法。采用化学法生产的(R)-3-羟基丁酸会残留较多重金属，其光学纯度低；而采用生物发酵法生产(R)-3-羟基丁酸，发酵过程缓慢，耗时长、效率低，且发酵过程难以控制，生产(R)-3-羟基丁酸的质量稳定性差，不适合工业化生产。[0004]因此，亟需提供有一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法，能够制备出纯度高的(R)-3-羟基丁酸，且操作简单、生产效率高，适合工业化量产。发明内容[0005]本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法，能够制备出纯度高的(R)-3-羟基丁酸，且操作简单、生产效率高。[0006]一种(R)-3-羟基丁酸的制备方法，包括以下步骤：[0007]将聚[(R)-3-羟基丁酸]粉碎，加入缓冲溶液，然后加入丝氨酸酯酶和金属盐，酶解，灭酶，脱盐，制得(R)-3-羟基丁酸；所述金属盐为镁盐或/和锌盐。[0008]优选的，所述丝氨酸酯酶为角质酶；进一步优选的，所述角质酶由米曲霉菌发酵制得，并经分离提纯精制，属于工业级角质酶。[0009]镁盐和锌盐可以提高丝氨酸酯酶，尤其是角质酶的活性。[0