一种多拉菌素的分离纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112194693A(43)申请公布日2021.01.08(21)申请号202011150319.4(22)申请日2020.10.23(71)申请人内蒙古拜克生物有限公司地址010206内蒙古自治区呼和浩特市托克托县托克托工业园区(72)发明人常俊义周彦乐叶朋刘强王奇(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人宋秀兰(51)Int.Cl.C07H17/08(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种多拉菌素的分离纯化方法(57)摘要本发明涉及工业微生物技术领域，具体涉及一种多拉菌素的分离纯化方法，所述方法包括如下步骤：(1)将多拉菌素发酵液加入聚丙烯酰胺，过滤，得到菌渣；(2)向菌渣中加入溶剂A提取，过滤，得到滤液1和滤渣1；将滤渣1加入溶剂B提取，过滤，得到滤液2和滤渣2；将滤渣2加入溶剂C提取，过滤，得到滤液3；(3)将滤液1、滤液2和滤液3混合，浓缩成浸膏，加入溶剂D和活性炭，过滤，得到滤液4；(4)将滤液4浓缩、干燥，得到粗品；(5)将粗品用溶剂E溶解，程序降温结晶，过滤、干燥，即得。本发明具有纯度和收率高、脱色效果好的优点。CN112194693ACN112194693A权利要求书1/1页1.一种多拉菌素的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将多拉菌素发酵液加入聚丙烯酰胺，过滤，得到菌渣；(2)向菌渣中加入溶剂A提取，过滤，得到滤液1和滤渣1；将滤渣1加入溶剂B提取，过滤，得到滤液2和滤渣2；将滤渣2加入溶剂C提取，过滤，得到滤液3；(3)将滤液1、滤液2和滤液3混合，浓缩成浸膏，加入溶剂D和活性炭，过滤，得到滤液4；(4)将滤液4浓缩、干燥，得到粗品；(5)将粗品用溶剂E溶解，程序降温结晶，过滤、干燥，即得。2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述聚丙烯酰胺的分子量为30万-100万；所述聚丙烯酰胺的质量为多拉菌素发酵液质量的1-5％。3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂A为50-80％的乙醇溶液；所述菌渣与溶剂A的质量体积比为1:2-4g/mL；所述溶剂A提取温度为40-60℃，提取时间为0.5-1h。4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂B为甲醇、水和乙腈的混合溶剂，三者体积比为2-4:1-2:1。5.根据权利要求4所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述滤渣1与溶剂B的质量体积比为1:2-4g/mL；所述溶剂B的提取温度为40-60℃，提取时间为0.5-1h。6.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂C为乙酸乙酯和无水乙醇的混合溶剂，两者体积比为0.5-2:1；所述滤渣2与溶剂C的质量体积比为1:3-8g/mL；所述溶剂C的提取温度为40-60℃，提取时间为0.5-1h。7.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中所述溶剂D为55-70％乙醇溶液与异丙醚的混合溶剂，两者体积比为1-3:2。8.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中所述浸膏与溶剂D的质量体积比为1:15-30g/mL；所述浸膏与活性炭的质量比为1:0.5-1.5。9.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(5)中所述溶剂E为丙酮和无水乙醇的混合溶剂，两者体积比为1-3:1；所述粗品与溶剂E的质量体积比为1:5-10g/mL。10.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤(5)中所述程序降温具体为：在50-60℃下搅拌1-2h，然后以1-2℃/min的降温速率降温至20-30℃，再以8-15℃/h的降温速率降温至5-10℃。2CN112194693A说明书1/6页一种多拉菌素的分离纯化方法技术领域[0001]本发明涉及工业微生物技术领域，具体涉及一种多拉菌素的分离纯化方法。背景技术[0002]多拉菌素(Doramectin，DRM)是大环内酯类抗生素阿维菌素的第3代衍生物，由阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)基因工程变异株加入环已烷基羧酸后生物合成获得一种十六元大环内酯类半合成抗生素，与伊维菌素的差别为在C25位上具有环已烷基。化学名25-环己烷基-5-O-去甲基-25-去(1-甲基丙基)阿维菌素B1，其化学本质上属于大环内酯类抗生素，分子式为C50H74O14，分子量为899.11，熔点：116℃-119℃，脂溶性高，易溶于有机溶剂，比如甲醇、乙醇、丙酮、1,2-丙二醇、乙酸乙酯、二甲基亚砜、乙酸异丙酯和己烷等，在水中溶解度低(0.0006-0.0009mg/L)；对酸敏感，