一种化学-酶法制备螺内酯的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113528607A(43)申请公布日2021.10.22(21)申请号202110905013.3(22)申请日2021.08.08(71)申请人浙江神洲药业有限公司地址317306浙江省台州市仙居县福应街道现代工业集聚区鸿运路9号(72)发明人王友富邵振平王荣罗敏王洪福黄橙橙雷灵芝(74)专利代理机构北京红福盈知识产权代理事务所(普通合伙)11525代理人陈月福(51)Int.Cl.C12P33/20(2006.01)C07J21/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页序列表25页附图3页(54)发明名称一种化学-酶法制备螺内酯的方法(57)摘要本发明公开了一种化学‑酶法制备螺内酯的方法，属于有机合成技术领域。本发明提供的化学‑酶法制备螺内酯的方法以4AD为原料，经烯醇醚化、环氧化、内酯化、酶法脱氢和硫代反应得到螺内酯。本发明螺内酯合成工艺路线采用的酶法脱氢的方法专一性好，条件温和，不需要特殊设备，催化速率高；本发明方法所涉及各步反应产物纯化容易，最终产物总质量收率高于92％，HPLC纯度大于99.8％；本发明方法成本低，适合工业化大规模生产，具有良好的经济效益。CN113528607ACN113528607A权利要求书1/2页1.一种化学‑酶法制备螺内酯的方法，其特征在于，该方法的合成路线如下：具体包括如下步骤：1)将4‑雄烯‑3,17二酮投入无水乙醇中，加入原甲酸三乙酯和对甲苯磺酸，保温40～45℃反应，待反应完成后，过滤，烘干得到3‑乙氧基‑雄甾‑3,5‑二烯‑17‑酮(1)；2)投入二甲亚砜、乙醇钠和三甲基溴化锍，0～50℃搅拌半小时，投入3‑乙氧基‑雄甾‑3,5‑二烯‑17‑酮(1)，保温0～50℃反应，待反应完成后，加水，过滤，干燥得17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)；3)在无水乙醇中投入乙醇钠和丙二酸二乙酯，保温30～80℃反应，投入17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)，保温30～80℃反应完成后，加入氢氧化钠水溶液，回流反应，待反应完成后，加水，过滤，干燥得17β‑羟基‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯‑21‑羧酸‑γ‑内酯(3)；4)将17β‑羟基‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯‑21‑羧酸‑γ‑内酯(3)、二甲基四氢呋喃和碱性磷酸酶缓冲溶液构成酶反应体系，加入胆固醇氧化酶、辅酶I、辅酶再生系统和硫酸镁，在28‑37℃的温度条件下进行生物酶促反应，整个反应过程控制pH在7.0～7.5，通过HPLC检测生物酶促反应进程，当转化率达到95～99％时，反应结束，经过后续处理，得到17β‑羟基‑17α孕甾‑4,6‑二烯‑3‑酮‑21‑羧酸γ‑内酯(4)；5)在17β‑羟基‑17α孕甾‑4,6‑二烯‑3‑酮‑21‑羧酸γ‑内酯(4)中依次投入甲醇和硫代醋酸，回流2‑5小时，降温至0℃，过滤，得到的固体用甲醇结晶精制，干燥得到所述的螺内酯。2.根据权利要求1所述的化学‑酶法制备螺内酯的方法，其特征在于，步骤1)中所述无水乙醇的体积用量为底物4‑雄烯‑3,17二酮重量的0.5～10倍；所述原甲酸三乙酯的体积用量为底物4‑雄烯‑3,17二酮重量的0.6～3倍；所述对甲苯磺酸的重量用量为底物4‑雄烯‑3,17二酮重量的0.01～0.1倍。3.根据权利要求1所述的化学‑酶法制备螺内酯的方法，其特征在于，步骤2)中所述二甲亚砜的体积用量为底物3‑乙氧基‑雄甾‑3,5‑二烯‑17‑酮(1)重量的2～10倍；所述乙醇钠的重量用量为底物3‑乙氧基‑雄甾‑3,5‑二烯‑17‑酮(1)重量的0.22～0.6倍；所述三甲基溴化锍的重量用量为底物3‑乙氧基‑雄甾‑3,5‑二烯‑17‑酮(1)重量的0.5～1倍。4.根据权利要求1所述的化学‑酶法制备螺内酯的方法，其特征在于，步骤3)中所述无2CN113528607A权利要求书2/2页水乙醇的体积用量为底物17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)重量的2～10倍；所述乙醇钠的重量用量为底物17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)重量的0.21～1倍；所述丙二酸二乙酯的体积用量为底物17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)重量的0.5～2.3倍；所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为10～20％，其体积用量为底物17β，20β‑环氧‑3‑乙氧基‑17α‑孕甾‑3,5‑二烯(2)重量的1～3倍。5.根据权利要求1所述的化学‑酶法制备螺内酯的方法，其特征在于，步骤4)中所述辅酶I为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，所述辅酶再生系统由葡萄糖和葡萄糖脱氢酶的按一定比例混合组成；上述各物料