一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621664A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110854332.6(22)申请日2021.07.28(71)申请人广西大学地址530004广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路100号(72)发明人曾伟梁智群陈桂光冷硕张宇堋(74)专利代理机构南宁市来来专利代理事务所(普通合伙)45118代理人来光业(51)Int.Cl.C12P19/04(2006.01)C12N9/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法(57)摘要本发明属于功能性低聚糖制备技术领域，具体公开了一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法。该方法选择能够产生果糖基转移酶的黑曲霉或米曲霉制备果糖基转移酶制剂，选择只利用葡萄糖作为碳源而无法水解低聚果糖的酿酒酵母或异常威克汉姆酵母制备能够消耗葡萄糖的微生物细胞，在此基础上利用蔗糖为底物，先添加果糖基转移酶制剂进行部分转糖苷作用，随后添加能够消耗葡萄糖的微生物细胞，同步进行果糖基转移酶制剂的转糖苷作用和微生物细胞耗糖，从而获得含量大于95％的高纯度低聚果糖。本发明方法具有工艺简单、成本低、产品纯度和回收率高的优点，极具工业化生产潜力。CN113621664ACN113621664A权利要求书1/1页1.一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备果糖基转移酶制剂选择能够产生果糖基转移酶的优良菌株黑曲霉或米曲霉，在适宜的培养基和培养条件下培养24～48h，培养液经离心或膜分离技术收集含果糖基转移酶的菌丝体，将菌丝体保持完整、或经粉碎制成细胞碎片或粉末、或制成固定化细胞，即为果糖基转移酶制剂；（2）制备能够消耗葡萄糖的微生物细胞选择只利用葡萄糖作为碳源而无法水解低聚果糖的优良菌株酿酒酵母或异常威克汉姆酵母，在适宜的培养基和培养条件下培养24～48h，培养液经离心收集菌体细胞，将菌体细胞保持完整、或制成固定化细胞；（3）以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖在发酵罐中配制浓度为400～700g/L的蔗糖溶液，装液量40～70%，v/v；按一定比例添加果糖基转移酶制剂于蔗糖溶液中，在温度45～55℃、转速100～200rpm条件下进行转糖苷作用3～5h；随后按一定比例添加能够消耗葡萄糖的微生物细胞，在温度28～37℃、pH维持5.0～6.0、转速100～500rpm、通气量0.5～2.0vvm的条件下继续作用24～48h；经脱色、过滤即可获得高纯度低聚果糖；所述的果糖基转移酶制剂的添加比例为：0.05～0.2%，w/v，的完整、或经粉碎制成细胞碎片或粉末的菌丝体，或0.5～2%，w/v，的固定化细胞；所述的能够消耗葡萄糖的微生物细胞的添加比例为：10～20%，v/v，的完整菌体细胞或固定化细胞。2.根据权利要求1所述的以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的适宜的培养基为：白砂糖100～200g/L，玉米浆干粉10～50g/L，ZnSO41～5g/L；所述的适宜的培养条件为：初始pH值5.0～6.0，培养基装液量40～70%，v/v，接种量1～5%，v/v，搅拌速度100～500rpm，通气量0.5～2.0vvm，培养温度28～37℃。3.根据权利要求1所述的以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的所述膜分离技术为真空抽滤、板框过滤或超滤中的任意一种。4.根据权利要求1所述的以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，所述固定化细胞是采用海藻酸钙、壳聚糖或卡拉胶中的任意一种或多种作为固定化载体，以戊二醛作为交联剂制备。5.根据权利要求1所述的以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的适宜的培养基为：葡萄糖10～50g/L；麦芽汁1～5%，w/v；酵母膏5～20g/L；MnSO40.1～0.5g/L；所述适宜的培养条件为：初始pH值5.0～6.0，培养基装液量40～70%，v/v，接种量5～20%，v/v，搅拌速度100～500rpm，通气量0.5～2.0vvm，培养温度28～37℃。6.根据权利要求1所述的以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法，其特征在于，所述蔗糖为白砂糖、黄砂糖、赤砂糖、绵白糖、单晶体冰糖、多晶体冰糖、红糖、黑糖、冰片糖、方糖、糖霜或液体糖浆中的任意一种或多种。2CN113621664A说明书1/6页一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法技术领域[0001]本发明属于功能性低聚糖制备技术领域，特别涉及一种以蔗糖为底物制备高纯度低聚果糖的方法。背景技术[0002]低聚果糖（Fructooligosaccharides，