一种制备β-紫罗兰酮半抗原的方法、人工抗原和抗体.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114671761A(43)申请公布日2022.06.28(21)申请号202210402729.6C07K14/77(2006.01)(22)申请日2022.04.18C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)(71)申请人中国农业科学院烟草研究所（中国G01N33/53(2006.01)烟草总公司青州烟草研究所）G01N33/577(2006.01)地址266000山东省青岛市崂山区科苑经四路11号(72)发明人方松刘雪孔凡玉郭永峰宁扬邱军宋德安(74)专利代理机构青岛华智行远知识产权代理事务所(普通合伙)37351专利代理师付素心(51)Int.Cl.C07C69/40(2006.01)C07C67/08(2006.01)C07K14/765(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称一种制备β-紫罗兰酮半抗原的方法、人工抗原和抗体(57)摘要本发明属于农产品及食品质量检测技术领域，公开了一种制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法、人工抗原和抗体，通过β‑紫罗兰酮的醛基基团直接引入羧基基团，通过还原反应产生羟基，并得到带有羧基的间隔臂。本发明通过β‑紫罗兰酮上的羟基基团直接引入羧基基团，最大限度的保留了β‑紫罗兰酮的化学结构和特征，并可直接与载体蛋白偶联，为后续制备高特异性高灵敏度的β‑紫罗兰酮抗体奠定了基础。同时本发明基于β‑紫罗兰酮的结构中醛基基团，直接通过还原反应产生羟基，并产生带有羧基的间隔臂，原料较为普通，反应操作简单，不需高温高压条件，易于控制，制备的β‑紫罗兰酮半抗原的纯度和收率均较高。CN114671761ACN114671761A权利要求书1/1页1.一种制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法，其特征在于，所述制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法包括：通过β‑紫罗兰酮的醛基基团直接引入羧基基团，通过还原反应产生羟基，并得到带有羧基的间隔臂。2.如权利要求1所述制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法，其特征在于，所述制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法包括以下步骤：步骤一，将β‑紫罗兰酮溶于甲醇，冰浴条件下分批加入硼氢化钠，并于冰浴条件下反应1小时；步骤二，用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取有机相，水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物A；步骤三，将得到的化合物A溶于干燥二氯甲烷，加入三乙胺；冰浴条件下下分批加入琥珀酸酐，并于室温反应5小时；步骤四，用饱和食盐水淬灭反应，乙酸乙酯萃取有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗β‑紫罗兰酮半抗原；用HPLC高效液相色谱纯化制备得到粗β‑紫罗兰酮半抗原即可。3.如权利要求1所述制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法，其特征在于，所述β‑紫罗兰酮和琥珀酸酐的摩尔质量比为1:3。4.一种包含如权利要求1所述β‑紫罗兰酮半抗原与产生抗原性的载体蛋白的β‑紫罗兰酮人工抗原。5.如权利要求4所述β‑紫罗兰酮人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白；所述β‑紫罗兰酮人工抗原可为免疫原或包被原。6.一种制备如权利要求4所述β‑紫罗兰酮人工抗原的方法，其特征在于，所述制备β‑紫罗兰酮人工抗原的方法包括：通过碳二亚胺法偶联β‑紫罗兰酮与载体蛋白制备免疫原；和/或，通过混合酸酐法偶联β‑紫罗兰酮与载体蛋白制备包被原。7.一种如权利要求4所述β‑紫罗兰酮人工抗原的抗体，其特征在于，所述抗体能够结合至少一个β‑紫罗兰酮的结构表位。8.如权利要求7所述抗体，其特征在于，所述抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体。9.一种如权利要求7所述抗体在检测或测定天然植物、农产品中β‑紫罗兰酮的应用。2CN114671761A说明书1/9页一种制备β‑紫罗兰酮半抗原的方法、人工抗原和抗体技术领域[0001]本发明属于农产品及食品质量检测技术领域，尤其涉及一种β‑紫罗兰酮半抗原、人工抗原和抗体、制备方法、应用。背景技术[0002]目前，β‑紫罗兰酮是芷香酮，属于萜类物质，主要存在于覆盆子、树莓等果实以及牵牛花等花瓣中，也是烟草中重要的香味成分。β‑紫罗兰酮具有较低的嗅觉阈值，且在室温下具有覆盆子香气，香气较柔和而木香稍重，被稀释后具有类似紫罗兰花和柏木香气，有似悬钩子果香低韵，因此是烟草中香味成分的关键组分。各国烟草企业竭力设法降低卷烟烟气中焦油的含量.导致卷烟烟气的香味明显不足，难以适应吸烟消费者的要求，因此β‑紫罗兰酮也成为了烟草香料添加的主要成分。此外，β‑紫罗兰酮具有多种生物活性，其抗癌活性是当前研究的热点，并可成为一种潜在的癌症化学预防剂。[0003]天然植物提取和化学合成是β‑紫罗兰酮生产的主要方式。近年来，受健康生活观念的影响，消费者日益倾向于选择天然食用香料，因此对天然香