一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114773338A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210436730.0(22)申请日2022.04.25(71)申请人杭州同舟生物技术有限公司地址310018浙江省杭州市江干区经济技术开发区白杨街道银海街550号2幢第二层B区(72)发明人邵越水王镇阮天宇(74)专利代理机构浙江千克知识产权代理有限公司33246专利代理师黎双华(51)Int.Cl.C07D471/04(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K16/06(2006.01)C07K16/44(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图5页(54)发明名称一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用(57)摘要发明公开了一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。曲唑酮人工半抗原的分子结构式如式（Ⅰ），曲唑酮人工抗原的分子结构式如式（Ⅱ）。所述应用是所述曲唑酮人工抗原在制备抗曲唑酮抗体中的应用。本发明的曲唑酮人工半抗原最大程度地保留了曲唑酮的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的曲唑酮人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗曲唑酮抗体，经免疫新西兰白兔获得的免疫血清的效价很高，可用于对曲唑酮进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。CN114773338ACN114773338A权利要求书1/2页1.一种曲唑酮人工半抗原，其特征在于，其分子结构式如（Ⅰ）所示：（Ⅰ）。2.如权利要求1所述曲唑酮人工半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将吡啶三唑酮与氢化钠反应，反应结束后与一氯三碘丙烷继续反应，得到产物A；（2）将产物A与1‑（3‑甲氧基苯基）哌嗪盐酸盐反应，得到黄色油状物B；（3）将黄色油状物B加酸水解，得到白色轻质固体C；（4）将白色轻质固体C与氢化钠、溴乙酸乙酯反应，得到黄色油状物D；（5）将黄色油状物D与碱液发生水解反应，反应结束后，调节溶液pH至酸性，经萃取纯化后得到白色固体Ⅰ，即权利要求1所述的曲唑酮人工半抗原。3.根据权利要求2所述曲唑酮人工半抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中：氢化钠的物质的量与吡啶三唑酮相同，与氢化钠反应温度为70~85℃，反应时间0.5~2h；一氯三碘丙烷的物质的量为吡啶三唑酮的12倍，与~一氯三碘丙烷反应为95~105℃，反应时间15~24h。4.根据权利要求2所述曲唑酮人工半抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中：产物A与1‑（3‑甲氧基苯基）哌嗪盐酸盐的摩尔比为1：（1~2），反应温度105~115℃，回流反应3~8小时。5.根据权利要求2所述曲唑酮人工半抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中：氢化钠的物质的量与白色轻质固体C相同；溴乙酸乙酯的物质的量为白色轻质固体C的1~3倍；反应温度为55~70℃，回流反应0.5~2h。6.一种曲唑酮人工抗原，其特征在于，其分子结构式如（Ⅱ）所示：；（Ⅱ）其中，BSA为牛血清蛋白。7.如权利要求6所述曲唑酮人工抗原的制备方法，其特征在于，2CN114773338A权利要求书2/2页所述曲唑酮人工抗原通过活泼酯法使权利要求1所述的曲唑酮人工半抗原与牛血清蛋白结合，获得曲唑酮人工抗原。8.根据权利要求7所述的人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）将权利要求1所述曲唑酮人工半抗原Ⅰ、N‑羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺按摩尔比1∶1.35~1.5∶1.35~1.5混合于N，N‑二甲基甲酰胺中，20~30℃下搅拌反应18~20小时，反应结束后离心取上清液；（b）将上述上清液滴加到牛血清蛋白溶液中，混合液置于1~5℃下静置过夜，经透析、离心取上清液，获得曲唑酮人工抗原。9.如权利要求6所述曲唑酮人工抗原在制备抗曲唑酮抗体中的应用。10.一种抗曲唑酮抗体，其特征在于，其由所述权利要求6所述曲唑酮人工抗原经动物免疫得到的、可与曲唑酮发生特异性免疫反应的球蛋白。3CN114773338A说明书1/13页一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种曲唑酮人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。背景技术[0002]曲唑酮为抗抑郁药。用于治疗各种类型的抑郁症和伴有抑郁症状的焦虑症以及药物依赖者戒断后的情绪障碍。服用曲唑酮常见不良反应为嗜睡、疲乏、头昏、失眠、紧张和震颤等；以及视物模糊、口干、便秘。少见体位性低血压(进餐时同时服药可减轻)、心动过速、恶心、呕吐和腹部不适。极少数病人出现肌肉骨骼疼痛和多梦。[0003]临床研究中曾报道一些不良反应可能与盐酸曲唑酮的使用有关：静坐不能、过敏反应、贫血、胃胀气、排尿异常、性功能障碍