一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114778820A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210435654.1(22)申请日2022.04.24(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人沈玉栋李露杨金易徐振林王弘孙远明(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师段卉(51)Int.Cl.G01N33/533(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书2页说明书12页附图9页(54)发明名称一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，以铕‑(Eu‑)荧光纳米粒子为示踪物标记泰妙菌素单克隆抗体，选择合适的荧光微球粒径，活化缓冲溶液的pH值，抗体稀释液和抗体用量，制备标记泰妙菌素单克隆抗体的时间分辨荧光微球探针，能提高时间分辨荧光微球与抗体的结合效率，促进探针释放，提高其检测灵敏度，减少抗原、抗体用量，适用于检测鸡蛋、鸡肉和猪肉等样品中的泰妙菌素。样品前处理方法简单，对鸡蛋、鸡肉和猪肉等样品中的泰妙菌素裸眼检测限为0.5ng/mL，定量检测限为0.07～0.13ng/mL，回收率为75.0％～101.8％，标准偏差为2.2％～29.5％。CN114778820ACN114778820A权利要求书1/2页1.一种时间分辨荧光微球探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S11：溶解：混合时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液，充分混匀；所述时间分辨荧光微球的粒径为100～300nm，所述MES缓冲溶液pH为5～7；S12：活化：36.5～37.5℃条件下活化步骤S11MES缓冲溶液溶解的时间分辨荧光微球的羧基基团；S13：标记：混合步骤S12活化的时间分辨荧光微球、硼酸盐缓冲液和泰妙菌素抗体稀释液，充分混匀，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球；所述泰妙菌素抗体与时间分辨荧光微球的质量比为0.5～1.5：50，所述泰妙菌素抗体稀释液由硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到；S14：封闭，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球探针。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S11所述时间分辨荧光微球的粒径为100～200nm。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S11所述MES缓冲溶液pH为5～6。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S13所述泰妙菌素抗体稀释液由0.008～0.012mol/L硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到。5.权利要求1～4任一所述制备方法制备得到的时间分辨荧光微球探针。6.一种时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S21：划膜：将0.25～1mg/mL的泰妙菌素抗原TML‑O‑OVA划到时间分辨荧光免疫层析试纸条的NC膜T线上；将0.28～0.4mg/mL的羊抗鼠IgG划到NC膜C线上；所述泰妙菌素抗原TML‑O‑OVA的结构式如式Ⅰ所示：S22：处理样品垫：将时间分辨荧光免疫层析试纸条的玻璃纤维膜浸泡于样品垫处理液中，充分浸泡后取出玻璃纤维膜，烘干备用，所述样品垫处理液为0.1％～0.4％Tween‑20溶液；S23：组装试纸条。7.根据权利要求6所述时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S22中，检测鸡肉样品所用样品垫处理液为0.1～0.3％Tween‑20溶液，检测蛋类和/或猪肉样品所用样品垫处理液为0.3％～0.4％Tween‑20溶液。8.权利要求6或7所述制备方法制备得到的时间分辨荧光免疫层析试纸条。9.权利要求5所述时间分辨荧光微球探针和/或权利要求8所述时间分辨荧光免疫层析试纸条在制备检测泰妙菌素产品中的应用。2CN114778820A权利要求书2/2页10.一种检测泰妙菌素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求5所述时间分辨荧光微球探针、权利要求8所述时间分辨荧光免疫层析试纸条和样品稀释液，所述样品或泰妙菌素标准品样品稀释液含有0.1～0.3mol/LPB溶液。3CN114778820A说明书1/12页一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及兽药残留检测技术领域，具体地，涉及一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。背景技术[0002]泰妙菌素(Tiamulin，TML)是截短侧耳类药物，为畜禽专用抗生素，对细菌、螺旋体和支原体等具有良好的抗菌活性，常用于防治鸡的慢性呼吸道疾病、猪的疟疾和支原体引起的各种畜禽疾病，治疗效果显著。但其残留于畜禽食品