液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114910581A(43)申请公布日2022.08.16(21)申请号202210419408.7(22)申请日2022.04.20(71)申请人宁波海关技术中心地址315000浙江省宁波市高新区清逸路66号A座(72)发明人周洁李双方科益陈树兵(74)专利代理机构浙江千克知识产权代理有限公司33246专利代理师赵芳(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/72(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图4页(54)发明名称液相色谱-高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法(57)摘要本发明公开了液相色谱‑高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法，所述氯丙醇酯包括两种缩水甘油酯、两种氯丙醇单酯和三种氯丙醇双酯；所述方法采用两级提取法，第一级采用甲醇振荡提取、C18固相萃取柱净化，完成对缩水甘油酯和部分氯丙醇单酯的提取和净化工作，第二级采用二氯甲烷、甲醇体积比8:2的混合溶剂提取，中性氧化铝粉净化，去除油脂干扰的同时，可完成对氯丙醇双酯的提取与净化，合并第一、二级提取液，用高效液相色谱‑高分辨质谱联用仪检测，采用外标法定量，即可实现对奶粉中氯丙醇酯的高通量筛查，方法检出限为0.02mg/kg，定量限为0.05mg/kg，回收率≥80.6％，标准偏差低于10％，该方法对高蛋白、高脂肪的奶粉基质具有较强的适用性。CN114910581ACN114910581A权利要求书1/2页1.液相色谱‑高分辨质谱快速测定奶粉中氯丙醇酯含量的方法，所述氯丙醇酯为缩水甘油‑棕榈酸酯、缩水甘油‑硬脂酸酯、3‑氯丙醇‑2‑硬脂酸单酯、3‑氯丙醇‑1‑棕榈酸单酯、3‑氯丙醇‑1,2‑棕榈酸二酯、2‑氯丙醇‑1,3‑硬脂酸二酯、3‑氯丙醇‑1‑棕榈酸‑2‑硬脂酸二酯中的一种或多种；其特征在于所述方法包括以下步骤：(A)样品前处理(1)从奶粉样品中提取脂肪样品，脂肪样品用甲醇提取，离心，得到有机相A及残渣A；(2)取步骤(1)的有机相A经C18固相萃取柱净化，甲醇淋洗，二氯甲烷和甲醇的体积比8:2的混合溶剂作为洗脱剂进行洗脱，所得洗脱液经氮吹浓缩近干，加入甲醇溶液复溶；(3)取步骤(1)的残渣A加入二氯甲烷和甲醇的体积比8:2的混合溶剂进行二次提取，离心，得到有机相B及残渣B；(4)取步骤(3)的有机相B，氮吹浓缩近干，加入甲醇溶液复溶，加入中性氧化铝粉充分震荡后离心，得到上清液C及沉淀C；(5)合并步骤(2)的甲醇溶液和步骤(4)的上清液C，氮吹浓缩，甲醇定容至2.0mL，滤膜过滤，得到供试品溶液；(B)高效液相色谱‑高分辨质谱检测供试品溶液用高效液相色谱‑高分辨质谱联用仪检测，采用外标法定量，得到奶粉中7种氯丙醇酯含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，洗脱剂的体积为2个C18固相萃取柱的柱体积。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)中，中性氧化铝粉的用量与脂肪样品的质量比为0.5～1：1。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)中，所述中性氧化铝粉末粒度为100‑200目。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(B)中，高效液相色谱的条件为：C18色谱柱，流动相A：0.02mM乙酸钠的甲醇‑水溶液，其中甲醇、水的体积比为9:1；流动相B：0.02mM乙酸钠的异丙醇‑甲醇溶液，其中异丙醇、甲醇的体积比为1:1；梯度洗脱。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述步骤(B)中，液相色谱的梯度洗脱程序如下表梯度洗脱程序2CN114910581A权利要求书2/2页7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(B)中，高分辨质谱的条件为：质谱条件：在正/负离子转换模式下进行全扫描测定，质量范围：m/z100～1000，负离子模式2800V，正离子模式3500V，离子传输管温度为320℃，鞘气N2流量35L/h，辅助气N2流量15L/h，气化室温度380℃；源内裂解电压为40eV，最大注入时长为250ms；二级采用自动触发模式(dd‑MS2)，相对碰撞能量范围10‑40％。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(B)中，外标法定量的操作步骤为：将供试品溶液用液相色谱‑高分辨质谱联用仪进行检测，得到供试品溶液的提取离子流色谱图，供试品溶液的各待测成分的的峰面积与与其对应的标准品的标准曲线比较，计算得到供试品溶液中各待测成分的浓度，相应换算得到脂肪样品中各待测成分的含量，再换算得到奶粉样品中各待测成分的含量。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，甲醇的体积用量以脂肪样品的质量计为8～20mL/g；所述步骤(3)中，二氯甲烷和甲醇的体积比8:2的混合