一种羰基还原酶不对称还原制备(-)-5-氮杂螺[2,4]庚烷-7-醇的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115466755A(43)申请公布日2022.12.13(21)申请号202211298841.6(22)申请日2022.10.24(71)申请人常州佳德医药科技有限公司地址213155江苏省常州市常州西太湖科技产业园长扬路9号A4栋五楼(72)发明人张文超吕列超于佳张林(74)专利代理机构常州西创专利代理事务所(普通合伙)32472专利代理师姬宁宁(51)Int.Cl.C12P17/10(2006.01)C12N9/04(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种羰基还原酶不对称还原制备(-)-5-氮杂螺[2,4]庚烷-7-醇的方法(57)摘要本发明公开了一种羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，包括羰基还原酶冻干粉的制备、(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的制备两步，反应路线短，操作步骤简单，具有原料便宜易得、利用率高、反应时间快、反应条件温和、产物手性纯度高、环境污染少等优点；本发明方法制备的(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的收率在85％以上(以5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑酮计)、目标产物ee值为100％。CN115466755ACN115466755A权利要求书1/1页1.一种羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：羰基还原酶冻干粉的制备，将ATCC7330菌株接种到Luria‑Bertani液体培养基上，接种量为1％，培养基中氯霉素含量为100μg/mL，培养温度为25℃，220rpm培养24h，当测得OD600浓度为0.6时加入异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷并使其浓度为0.4mM，25℃诱导16h，诱导结束后，离心收集菌体，经洗菌、重悬、超声破碎后冻干，获得羰基还原酶冻干粉；S2：将步骤S1制备的羰基还原酶冻干粉、辅酶、辅酶循环酶、缓冲液和溶剂混合制备成反应体系溶液，将5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑酮加入反应体系溶液中，在羰基还原酶的催化下，5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑酮进行不对称还原反应生成(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇。2.如权利要求1所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、丁醇、异丙醇、二甲基亚砜、水中的一种或几种。3.如权利要求2所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，缓冲液为甲酸盐缓冲液，其溶质摩尔浓度为0.05mol/L。4.如权利要求3所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，甲酸盐缓冲液为HCOOH‑HCOONa水溶液，其中溶剂与甲酸盐缓冲液的体积投料比为1:1～30。5.如权利要求4所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，溶剂为水，水与甲酸盐缓冲液的体积投料比为1:6。6.如权利要求1所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑酮和羰基还原酶在反应体系溶液中的质量浓度比为1:0.1～1，其中5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑酮质量浓度为3.5％。7.如权利要求1所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，辅酶为NADPH或NADH，辅酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:20～100；所述的辅酶循环酶为甲酸脱氢酶，甲酸脱氢酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:1.25。8.如权利要求7所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，辅酶为NADPH，辅酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:50。9.如权利要求1所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，羰基还原酶的催化反应温度为10～50℃，反应时间为1～2h，反应体系溶液的pH为6.5～8.0。10.如权利要求9所述的羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，羰基还原酶的催化反应温度为20～30℃。2CN115466755A说明书1/5页一种羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺[2,4]庚烷‑7‑醇的方法技术领域[0001]本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种羰基还原酶不对称还原制备(‑)‑5‑氮杂螺