一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115820572A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211122624.1A61P31/14(2006.01)(22)申请日2022.09.15(71)申请人军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所地址130122吉林省长春市南关区柳莺西路666号(72)发明人闫飞虎赵永坤冯娜王铁成毕津豪李恩涛杨松涛夏咸柱(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师薛红凡(51)Int.Cl.C12N7/01(2006.01)C12N15/63(2006.01)C12N15/40(2006.01)A61K39/12(2006.01)权利要求书1页说明书17页序列表（电子公布）附图7页(54)发明名称一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株及其构建方法和应用(57)摘要本发明提供了一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株及其构建方法和应用，属于病毒基因工程技术领域。本发明提供了表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，以弹状病毒科病毒为骨架含有两个拉沙热病毒的GP基因，并且定向敲除了狂犬病病毒基因组中原有的GP基因。本发明以构建的重组狂犬病病毒制备疫苗，不仅具有良好的安全性，具有良好的免疫原性，对拉沙热的预防和治疗具有重要意义。CN115820572ACN115820572A权利要求书1/1页1.一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，其特征在于，在弹状病毒科病毒的基础上，用两个拉沙热病毒GP基因替代弹状病毒科病毒中GP基因。2.根据权利要求1所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，其特征在于，所述拉沙热病毒GP基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，其特征在于，两个拉沙热病毒GP基因中的一个插在P基因和M基因之间，另外一个插在M基因和L基因之间。4.根据权利要求1～3任意一项所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，其特征在于，所述弹状病毒科病毒包括狂犬病病毒和水泡性口炎病毒。5.根据权利要求4所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株，其特征在于，所述狂犬病病毒的毒株为SRV9毒株。6.一种权利要求1～5任意一项所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)分别将两个拉沙热病毒GP基因克隆至含有SRV9全长基因组的重组全长质粒中，并替换SRV9GP基因，得到表达LASVGP的重组全长质粒；2)将步骤1)中所述表达LASVGP的重组全长质粒与辅助质粒共转染细胞进行病毒拯救，得到重组病毒rSRV9‑2LASV‑GP。7.根据权利要求6所述构建方法，其特征在于，步骤1)中扩增所述两个拉沙热病毒GP基因的引物包括LASV/GP‑F1/LASV/GP‑R1引物对和LASV/GP‑F2/LASV/GP‑R2引物对；所述LASV/GP‑F1的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；所述LASV/GP‑R1的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；所述LASV/GP‑F2的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示；所述LASV/GP‑R2的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示。8.根据权利要求6所述构建方法，其特征在于，步骤1)中所述辅助质粒包括表达狂犬病病毒的核蛋白的辅助质粒、表达狂犬病病毒的磷蛋白的辅助质粒、表达狂犬病病毒的RNA聚合酶的辅助质粒、表达狂犬病病毒的糖蛋白的辅助质粒；所述表达LASVGP的重组全长质粒、表达狂犬病病毒的核蛋白的辅助质粒、表达狂犬病病毒的磷蛋白的辅助质粒、表达狂犬病病毒的RNA聚合酶的辅助质粒和表达狂犬病病毒的糖蛋白的辅助质粒的质量比为2～3：0.1～0.2：0.6～0.7：0.25～0.3：3～4。9.根据权利要求6～8任意一项所述构建方法，其特征在于，所述细胞包括VeroE6细胞。10.权利要求1～5任意一项所述表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株或权利要求6～9任意一项所述构建方法得到的重组病毒株在制备预防拉沙热的疫苗和/或治疗拉沙热的药物中的应用。2CN115820572A说明书1/17页一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于病毒技术领域，具体涉及一种表达双拷贝拉沙热病毒GP基因的重组病毒株及其构建方法和应用。背景技术[0002]拉沙热(LassaFever,LF)是由拉沙热病毒(Lassafevervirus,LASV)引起的一种病毒性出血热。拉沙热病毒的天然宿主是多乳鼠，多分布在西非地区，其活动不受国界限制。人类可通过直接或间接接触带毒动物或其分泌物而发生感染，同时病毒也可在人与人之间传播，每年造成大量感染和死亡病例[1]。LF自1969年在