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一种基于CRISPR-Cas12a检测猪圆环4型病毒的引物、探针及检测方法.pdf

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本发明涉及生物技术领域,且公开了一种基于CRISPR?Cas12a检测猪圆环4型病毒的引物、探针及检测方法,包括以下操作步骤:(1)组织样品的处理;(2)病毒DNA的提取;(3)引物设计;(4)PCR产物回收及纯化;(5)标准质粒的构建;(6)重组质粒鉴定;(7)质粒DNA小量抽提;(8)crRNA纯化;(9)猪圆环病毒4型CRISPR?Cas12a检测体系建立;(10)实验结果;本研究在CRISPR技术的基础上与ERA技术相结合,建立了PCV4的快速检测方法,该方法敏感性高、特异性高、操作简单、检测时间短、结果分析简单、抗干扰性强、不需要复杂仪器设备,对于冷链运输和非专业人员,即使偏远地区也能对疫病进行实时监测,为PCV4的流行病学的调查,掌握其传播规律以及疫病的防控提供技术支持。