一种血虚小鼠模型的构建及评价方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110583573A(43)申请公布日2019.12.20(21)申请号201910905427.9(22)申请日2019.09.24(71)申请人山西大学地址030006山西省太原市坞城路92号(72)发明人秦雪梅李鑫琦刘月涛(74)专利代理机构太原申立德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)14115代理人程园园(51)Int.Cl.A01K67/02(2006.01)G01N27/62(2006.01)G01N33/50(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图4页(54)发明名称一种血虚小鼠模型的构建及评价方法(57)摘要本发明属于模型的评价方法技术领域，具体为一种血虚小鼠的模型构建方法及评价方法。主要解决现有血虚模型的评价方法存在精确性低、专属性差的技术问题。本发明采用代谢组学技术，分析空白对照组与模型组小鼠脾脏中内源性代谢产物的变化，通过CD软件对所有质谱谱图进行处理得到积分数据，并结合15个生物标志物的含量统计学分析空白对照组与模型组小鼠脾脏中的生物标志物的积分均值变化趋势，得出血虚小鼠脾脏代谢物含量的变化趋势，从而针对性的评价血虚小鼠的模型。本发明体现出模型复制的合理性和科学性，系统综合的表现出空白对照组与模型组小鼠机体轮廓，具有全面系统、高效、特异性强的优点，为新药研发和药理研究提供可靠的评价方法。CN110583573ACN110583573A权利要求书1/2页1.一种血虚小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：第一天对小鼠皮下注射20mg/kg的乙酰苯肼，第四天早上对小鼠皮下注射10mg/kg的乙酰苯肼，两个小时之后对小鼠腹腔注射20mg/kg的环磷酰胺，第四天到第七天对小鼠腹腔注射20mg/kg的环磷酰胺，即获得血虚小鼠模型。2.一种血虚小鼠模型的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：通过空白对照组与模型组小鼠机体脾脏中内源性代谢产物的变化来评价。3.根据权利里要求2所述的一种血虚小鼠模型的评价方法，其特征在于：所述的通过空白对照组与模型组小鼠机体脾脏中内源性代谢产物的变化来评价，具体为：在小鼠模型构建完成后，收集空白对照组小鼠与模型组小鼠的脾脏分别进行质谱分析，得出空白对照组与模型组小鼠的质谱谱图；分析空白对照组小鼠与模型组小鼠机体脾脏中内源性代谢产物的变化，使用CompoundDiscover软件对所有的质谱谱图进行处理得到积分数据，然后对空白对照组与模型组小鼠的质谱谱图积分数据矩阵进行多元统计分析，得出小鼠模型的轮廓图；对小鼠模型的轮廓图进行轮廓动态分析，得出小鼠模型的轮廓动态变化趋势图；进而采用主成分分析法对数据进行模式识别，得出生物标志物的含量变化，结合小鼠模型的动态轮廓变化趋势图和生物标志物的含量统计学分析，评价血虚小鼠模型是否构建成功。4.根据权利里要求3所述的一种血虚小鼠模型的的评价方法，其特征在于：所述的生物标志物为15个，分别为：4-Indolecarbaldehyde、Acetyl-L-carnitine、Azelnidipine、Cytarabine、Cytidine5'-monophosphate(hydrate)、Cytosine、Deoxyadenosinemonophosphate、L-Tryptophan、L-Glutathioneoxidized、N(6)-Methyladenosine、N-Acetyl-D-galactosamine4-sulfate、N-Acetyl-L-glutamicacid、Uracil、Uricacid和Xanthosine。5.根据权利要求4所述的一种血虚小鼠模型的评价方法，其特征存在于：所述15个生物标志物获取的具体方法为：首先分析得出的空白对照组与模型组的主成分分析法图，即PCA图；然后，观察PCA图，空白对照组与模型组能够显著分开，表明血虚小鼠模型造模成功；在PCA的基础上，利用正交偏最小二乘-判别分析法对正常对照组和模型组小鼠脾脏进一步分析，得到与正常对模型组小鼠脾脏轮廓图，通过载荷图对变量加载结果进行描述，利用变量重要性分析，S-plot相关性＞0.58并结合统计学p＜0.05获得潜在的生物标志物，从对照组与模型组中找到含量变化差异显著的变量，然后对空白对照组与模型组小鼠脾脏进行质谱分析得出质谱图谱进行积分，得出15个生物标志物的含量变化。6.根据权利要求3所述的一种血虚小鼠模型的评价方法，其特征存在于：所述的空白对照组小鼠，具体构建方法为：第一天对小鼠皮下注射20mg/kg的无菌水，第四天早上对小鼠皮下注射10mg/kg的无菌水，两个小时之后对小鼠腹腔注射20mg/kg的无菌水，第四天到第七天对小鼠腹腔注射20mg/kg的无菌水，即获得空白对照