一种海参体壁多糖及其提取、解析方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115873141A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202211098877.XG01N30/32(2006.01)(22)申请日2022.09.07G01N30/34(2006.01)G01N30/74(2006.01)(71)申请人海南大学地址570228海南省海口市人民大道58号(72)发明人李川王莞婷史亚丽曹君(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227专利代理师王洋(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)G01N21/3563(2014.01)G01N24/08(2006.01)G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/30(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图7页(54)发明名称一种海参体壁多糖及其提取、解析方法(57)摘要本发明提供了一种海参体壁多糖的提取和解析方法，包括如下步骤：A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。本发明以海参体壁为原料，进行预处理、酶解醇沉、脱色、除蛋白、分级柱层析、冻干即得成品。所得多糖结构完整且纯度高，为富含硫酸基的海参多糖提取纯化制备提供了有效手段。CN115873141ACN115873141A权利要求书1/1页1.一种海参体壁多糖的提取和解析方法，其特征在于，包括如下步骤：A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述脱脂为丙酮脱脂；所述冻干参数为‑60～‑25℃，真空度1‑3bar，10‑14h。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述酶解为采用木瓜蛋白酶酶解；所述酶解参数为10400u/g，所述酶加入量为0.2～0.5g。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述醇沉为采用无水乙醇沉淀；所述醇沉后为静置10～12h离心。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B)所述脱色为活性炭脱色，所述脱色具体为40℃搅拌脱色60min；所述除蛋白为采用三氟乙酸除蛋白。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B)所述透析为采用截留分子量为8000Da的透析袋透析48h；所述冻干参数为‑60～‑25℃，真空度1‑3bar，10‑14h。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述分级柱层析具体为先采用DEAE‑SepharoseFastFlow柱分级分离，洗脱后再经SephadexG‑100柱纯化。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述洗脱为采用梯度浓度的NaCl溶液洗脱；所述洗脱具体为:使用含0M，0.05M，0.5M，1M，1.5M，2M，3M和4MNaCl的0.1M乙酸钠溶液洗脱，设置1mL/min的流速，5min/管，收集洗脱溶液。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤D)具体为：所述海参精多糖采用高效液相色谱和离子色谱进行单糖组成的分析；所述海参精多糖通过高效液相色谱的LC系统测定多糖的均一性和分子量所述海参精多糖通过红外光谱和核磁共振光谱解析多糖的分子结构，通过VeriosG4UC扫描电子显微镜和X射线衍射仪观察多糖形貌以及分析多糖晶体结构。10.一种海参体壁多糖，其特征在于，由权利要求1～9任意一项所述的制备方法制备得到。2CN115873141A说明书1/9页一种海参体壁多糖及其提取、解析方法技术领域[0001]本发明涉及水产品加工技术领域，尤其是涉及一种海参体壁多糖及其提取、解析方法。背景技术[0002]我国海洋资源甚是丰富，开发利用海洋生物资源已成为一个重要领域和发展方向，其中海洋多糖由于其抗炎、抗肿瘤、抗病毒等活性，成为现在关注的热点之一。不同海参品种中的活性杂多糖结构和活性存在较大差异，多糖的分离提纯，及结构分析测定是研究其生物活性的基础，对于其构效关系的研究十分重要，且对于海参资源的开发利用具有一定的社会价值和经济价值。[0003]目前，国内专利对于海参多糖的开发已有所涉及。如现有专利CN102605031A公开了一种以海参内脏为原料，采用生物酶解技术、膜分离技术提取海参多糖、海参多肽的方法。海参下脚料中所含蛋白质及总糖的提取率可达到60～70％，目标产物中的有效活性成份含量较高，而且不含有溶剂残留，安全性高。专利CN1045