一种人血清白蛋白胰岛素偶联物及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894719A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211485710.9C07K1/107(2006.01)(22)申请日2022.11.24C07K1/20(2006.01)C07K1/34(2006.01)(71)申请人武汉禾元生物科技股份有限公司C07K1/36(2006.01)地址430000湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号(72)发明人董亮亮杨代常夏军陈蓉徐伟(74)专利代理机构北京律诚同业知识产权代理有限公司11006专利代理师黄韧敏(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)A61K47/64(2017.01)A61K38/28(2006.01)A61P3/10(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图8页(54)发明名称一种人血清白蛋白胰岛素偶联物及其制备方法(57)摘要本发明一种人血清白蛋白胰岛素偶联物，具有如下结构：HSA‑Linker‑Insulin；其中：HSA为重组人血清白蛋白，Linker为具有双官能团的小分子连接子，Insulin为胰岛素；与现有的胰岛素相比，本发明的胰岛素人血清白蛋白偶联产物半衰期及降糖维持时间显著延长，未来可减少给药频次，提高患者的顺从性。CN115894719ACN115894719A权利要求书1/2页1.一种人血清白蛋白胰岛素偶联物，具有如下结构：HSA‑Linker‑Insulin其中：HSA为重组人血清白蛋白，Linker为具有双官能团的小分子连接子，Insulin为胰岛素；所述的具有双官能团的小分子连接子为下述一种6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(EMCS)、6‑(3‑溴马来酰亚胺)己酸琥珀酰亚胺酯(Br‑EMCS)、4‑(N‑马来酰亚胺基甲基)环己烷‑1‑羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、4‑马来酰亚胺苯甲酸琥珀酰亚胺酯(SMB)、3‑(2‑吡啶二巯基)丙酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)或者它们的衍生物。2.根据权利要求1所述的人血清白蛋白胰岛素偶联物，其特征在于所述重组人血清白蛋白为植物源重组人血清白蛋白。3.根据权利要求1所述的人血清白蛋白胰岛素偶联物，其特征在于所述连接子为6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(EMCS)或N‑琥珀酰亚胺3‑(2‑吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)。4.制备权利要求1所述的人血清白蛋白胰岛素偶联物的方法，包括下述步骤：1)使胰岛素与双官能团连接子进行偶联反应，得到胰岛素‑双官能团连接子中间偶联产物；2)将步骤1)得到的胰岛素‑双官能团连接子中间偶联产物与重组人血清白蛋白反应，获得重组人血清白蛋白与胰岛素的终极偶联产物；3)纯化步骤2)得到的终极偶联产物，获得所述的人血清白蛋白胰岛素偶联物。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述双冠能团连接子为EMCS或SPDP，步骤1)和步骤2)的偶联反应中，胰岛素、双官能团连接子及重组人血清白蛋白的反应摩尔比为胰岛素：双官能团连接子：重组人血清白蛋白＝1:5:2。6.根据权利要求4所述的方法，其中在所述步骤1)之后进一步包括将步骤1)的胰岛素‑双冠能团连接子反应液通过脱盐或者超滤浓缩去除过量的双官能团连接子和反应中的有机溶剂的步骤，获得胰岛素‑双官能团连接子中间偶联产物。7.根据权利要求4所述的方法，其中所述步骤3)包括：3a)将步骤2)获得的终极偶联产物，用疏水层析介质进行纯化，所述疏水层析介质为PhenylHP；3b)用超滤膜浓缩步骤3a)获得的纯化液，得到人血清白蛋白胰岛素偶联物。8.根据权利要求4所述的方法，包括下述步骤：(1)胰岛素与EMCS偶联按照胰岛素与EMCS摩尔比1:5的比例，在胰岛素溶液中加入EMCS溶液中进行偶联反应，反应结束后，加入甘氨酸终止反应；(2)过量EMCS去除采用G‑25脱盐柱，去除步骤(1)反应后过量的EMCS；(3)胰岛素‑EMCS与重组人血清白蛋白偶联将步骤(2)脱盐后的胰岛素‑EMCS，按照胰岛素‑EMCS：人血清白蛋白摩尔比1：2的比例，加入重组人血清白蛋白进行偶联反应，反应结束后加入Cys终止反应；(4)OsrHSA‑EMCS‑Insulin偶联产物的纯化将步骤(3)得到的偶联产物采用PhenylHP层析柱进行纯化，层析条件为：2CN115894719A权利要求书2/2页平衡液：10mmol/LPB，0.5M硫酸铵，pH6.5；洗脱液：10mmol/LPB，0.025M硫酸铵，pH7.2；CIP：H2O；将洗脱收集液用50kDa超滤膜包浓缩后，加入pH7.2的10mmol/LPB浓缩透析，重复，获得OsrHSA‑EMCS‑Insulin偶联物。9.一种药物组合物，含有权利要求1～3任一项所述的人血清白蛋白胰岛素偶联物。3CN11