一种肝素结合蛋白测定试剂盒、制备方法及使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113588939A(43)申请公布日2021.11.02(21)申请号202110861228.X(22)申请日2021.07.29(71)申请人深圳市爱康试剂有限公司地址518109广东省深圳市龙华区观澜街道新澜社区观光路1303号鸿信工业园3号厂房501；1号厂房501(72)发明人柴辉徐剑文向艳丽骆昡陆春范凯(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书2页说明书12页附图1页(54)发明名称一种肝素结合蛋白测定试剂盒、制备方法及使用方法(57)摘要本发明公开了一种肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括固相标记物、示踪标记物、中和标记物、清洗液及底物；所述固相标记物包括包被抗体及固相支撑物，所述包被抗体标记于所述固相支撑物上；所述示踪标记物包括标记抗体及示踪物，所述标记抗体标记于所述示踪物上；所述中和标记物包括微球或磁珠中的一种，以及标记于所述微球或磁珠上的标记抗体；所述中和标记物中的标记抗体与示踪标记物中的标记抗体为针对同一表位的抗体；所述清洗液包括缓冲液及表面活性剂，所述底物为所述示踪物所对应的底物。该试剂盒通过与化学发光免疫分析仪结合，进行对样本中肝素结合蛋白含量的检测，该试剂盒检验灵敏度高、重现性好、准确度高，并且具有较宽的检测线性范围。CN113588939ACN113588939A权利要求书1/2页1.一种肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括固相标记物、示踪标记物、中和标记物、清洗液及底物；所述固相标记物包括包被抗体及固相支撑物，所述包被抗体标记于所述固相支撑物上；所述示踪标记物包括标记抗体及示踪物，所述标记抗体标记于所述示踪物上；所述中和标记物包括微球或磁珠中的一种，以及标记于所述微球或磁珠上的标记抗体；所述中和标记物中的标记抗体与示踪标记物中的标记抗体为针对HBP抗原同一表位的抗体；所述清洗液包括缓冲液及表面活性剂，所述底物为所述示踪物所对应的底物。2.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述包被抗体为第一HBP抗体，所述标记抗体为第二HBP抗体，所述第一HBP抗体与第二HBP抗体不具有相同的表位。3.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述中和标记物中的微球为乳胶微球，为一种白色微球或有色微球，所述微球的粒径为200‑5000nm，所述乳胶微球表面修饰有羟基、羧基或Toysal中至少一种功能基团；所述磁珠为超顺磁珠，所述磁珠的粒径为200‑5000nm，所述磁珠的表面修饰有功能基团，所述功能基团选自羧基、羟基或Toysal中的至少一种。4.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述固相支撑物选自微孔板或磁珠，所述微孔板由聚苯乙烯或聚氯乙烯制成，所述磁珠为超顺磁珠，所述磁珠的粒径为200‑5000nm，所述磁珠的表面修饰有功能基团，所述功能基团选自羧基、羟基或Toysal中的至少一种。5.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述所述示踪物包括酶或发光物质，所述酶选自碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，所述发光物质选自鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯及其衍生物或三联吡啶钌中的一种。6.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒满足以下工作浓度：固相标记物的工作浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL；微孔板固相包被浓度为0.5‑5μg/mL；示踪标记物的工作浓度为0.1μg/mL～5.0μg/mL；中和标记物的工作浓度为0.2μg/mL～8μg/mL。7.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述固相标记物中标记抗体的浓度为5～100μg抗体/mg磁珠；所述示踪标记物中标记抗体与示踪物的比例为1:1～1:50；所述中和标记物中标记抗体的浓度为5～100μg抗体/mg微球或磁珠。8.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述肝素结合蛋白测定试剂盒的检测线性范围为10‑1500ng/mL，所述肝素结合蛋白测定试剂盒的最低检测限度为不大于0.2ng/mL。9.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将HBP包被抗体包被到磁珠或微孔板上，得到固相标记物；(2)将HBP标记抗体标记到微球或磁珠上，得到中和标记物；(3)将HBP标记抗体标记到示踪物上，得到示踪标记物；(4)将固相标记物、中和标记物、示踪标记物、清洗液及底物组装得到试剂盒。2CN113588939A权利要求书2/2页10.根据权利要求9所述的肝素结合蛋白测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述固相标记物的制备方法，包括以下步骤：