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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925976A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210945463.XC12N5/10(2006.01)(22)申请日2019.11.21A61K35/17(2015.01)A61P35/00(2006.01)(62)分案原申请数据201911150678.72019.11.21(71)申请人博生吉医药科技(苏州)有限公司地址215000江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号生物纳米园B1楼413单元(72)发明人杨林游凤涛陈丹(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司31266专利代理师崔佳佳徐迅(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)权利要求书2页说明书18页C12N15/86(2006.01)序列表10页附图10页(54)发明名称CD7-CAR-T细胞及其制备和应用(57)摘要本发明提供了一种CD7‑CAR‑T细胞及其制备和应用。具体地,本发明提供了一种嵌合抗原受体(CAR),所述CAR的抗原结合结构域包括一个或多个CD7纳米抗体。本发明还提供了一种包含该CAR的CAR‑T细胞,所述CAR‑T细胞的内源性CD7表达是被阻断的。本发明的CAR‑T细胞可以用于T细胞肿瘤的治疗。CN115925976ACN115925976A权利要求书1/2页1.一种CD7阻断分子,其特征在于,所述的CD7阻断分子包括一个或多个CD7纳米抗体和内质网滞留序列。2.如权利要求1所述的CD7阻断分子,其特征在于,所述CD7阻断分子的结构如下式II所示:L’‑VHH’‑ER(II)式中,各“‑”独立地为连接肽或肽键;L’为信号肽序列;VHH’为包含两个CD7纳米抗体的结合区;ER为内质网滞留序列。3.如权利要求2所述的CD7阻断分子,其特征在于,所述的CD7纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.:24所示。4.如权利要求2所述的CD7阻断分子,其特征在于,所述VHH’的氨基酸序列如SEQIDNO.:6所示。5.一种核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1‑4中任一项所述的CD7阻断分子。6.一种载体,其特征在于,所述的载体含有权利要求5所述的核酸分子。7.一种工程化的免疫细胞,其特征在于,所述的免疫细胞含有权利要求6所述的载体、或染色体中整合有外源的权利要求5所述的核酸分子、或表达权利要求1所述的CD7阻断分子。8.一种权利要求1‑4中任一项所述的CD7阻断分子、或权利要求7所述的工程化的免疫细胞的用途,其特征在于,用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。9.一种制备工程化免疫细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提供一待改造的免疫细胞;和(2)将用于表达CAR的第一表达盒导入到所述免疫细胞;和(3)将用于表达权利要求1‑4中任一项所述的CD7阻断分子的第二表达盒导入到所述免疫细胞,从而获得所述的工程化免疫细胞;所述CAR的抗原结合结构域包括一个或多个CD7纳米抗体。10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述的CD7纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.:24所示。11.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述的CAR包含ICOS来源的胞内共刺激区和41BB来源的胞内共刺激区。12.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述CAR的结构如下式I所示:L‑VHH‑H‑TM‑C‑CD3ζ(I)式中,各“‑”独立地为连接肽或肽键;L为信号肽序列;VHH为包含一个或两个CD7纳米抗体的抗原结合结构域;H为铰链区;2CN115925976A权利要求书2/2页TM为跨膜结构域;C为共刺激信号分子;CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。13.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述的H为来源于Fc片段的铰链区。14.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述的TM为ICOS来源的跨膜区。15.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述CAR(优选地为C端)还包括细胞自杀元件。16.一种试剂组合,其特征在于,所述的试剂组合包括:(1)第一病毒载体,所述第一病毒载体含有第一表达盒,所述的第一表达盒用于表达CAR;和(2)第二病毒载体,所述第二病毒载体含有第二表达盒,所述的第二表达盒用于表达权利要求1‑4中任一项所述的CD7阻断分子;所述CAR的抗原结合结构域包括一个或多个CD7纳米抗体。17.如权利要求16所述的试剂组合,其特征在于,所述的CD7纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.:24所示。18.如权利要求16所述的试剂组合,其特征在于,所述的CAR包含ICOS来源的胞内共刺激区和41BB来源的胞内共刺激区。19.如权利要求16所述的试剂组合,其特征在于,所述CAR的结构如下式I所示: