一种无转基因残留基因编辑载体、构建方法及应用.pdf
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一种无转基因残留基因编辑载体、构建方法及应用.pdf
本发明公开了一种无转基因残留基因编辑载体,载体由FLP表达载体、Cas9表达盒和gRNA表达盒重组连接,具体为pLF_pREG2‑FLP_Ubi:MaCas9:Nos_pMaU6c:dBasI:esgRNA。本发明的基因编辑载体具有编辑效率高、外源转基因成分删除效率高、易检测,将其应用于植株编辑中,无需外源处理在胚再生阶段即可实现外源成分的删除。
一种重组载体及无转基因基因编辑植株的筛选方法.pdf
本发明公开了一种重组载体及无转基因基因编辑植株的筛选方法,该重组载体中原始载体为含有sgRNA基因、Cas9基因和筛选标签基因的用于植物基因编辑的CRISPR/Cas9载体,所述重组载体携带有BelRNAi表达元件,所述BelRNAi表达元件转录产生干扰苯达松抗性基因的发夹状RNA干扰片段。本发明在原始载体中引入BelRNAi表达元件,并对后代植株进行苯达松除草剂筛选,既保留了目的基因突变的后代,又确保了该突变后代中不含有转基因片段;筛选方法更为廉价,简单和有效。
一种用于对目标基因无痕编辑的载体及其构建与应用.pdf
本发明公开了一种在酵母中用于对目标基因无痕编辑的质粒载体PICZαHU,是以pPICZαA为出发载体连接完整的潮霉素抗性基因hph表达盒和完整的反向筛选标记基因upp表达盒构建获得,该质粒载体的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明还公开了所述质粒载体在球拟假丝酵母中基因组精简的基因组岛片段敲除中的应用。实验证实目的片段的删除不影响球拟假丝酵母生产槐糖脂的性能,证明了本发明所述无痕编辑质粒PICZαHU的可操作性和稳定性,具有良好的应用前景。
大豆多基因编辑表达载体及其构建方法与应用.pdf
本发明公开了大豆多基因编辑表达载体及其构建方法与应用。该大豆多基因表达载体包括至少2个大豆U6启动子表达的sgRNA表达盒串联形成的多基因编辑元件;每个所述大豆U6启动子表达的sgRNA表达盒依次包括大豆U6启动子、sgRNA靶序列识别区和Cas9蛋白结合的sgRNAscaffold区;每个所述大豆U6启动子表达的sgRNA表达盒中的sgRNA靶序列识别区对应不同靶基因;每个所述sgRNA表达盒中的大豆U6启动子不同。该大豆多基因编辑表达载体不仅可以补充大豆多基因编辑的方法,同时可以有效的提高编辑效率。
一种酵母基因组编辑载体及其构建方法和应用.pdf
本发明公开了一种酵母基因组编辑载体及其构建方法和应用,以gRNA编码质粒P为出发载体,在该载体的复制起始点Ori两端分别引入同向34bp的LoxP序列,并在质粒P骨架位置引入Cre重组酶基因表达盒,获得酵母基因组编辑载体。该载体在以CRISPR/Cas9为媒介的基因编辑中的应用,能实现对酿酒酵母基因组的高效、多轮编辑。