一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925923A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202211173660.0(22)申请日2022.09.26(71)申请人吉林大学地址130012吉林省长春市长春高新技术产业开发区前进大街2699号(72)发明人张应玖宋楚黎(74)专利代理机构长春吉大专利代理有限责任公司22201专利代理师刘世纯王恩远(51)Int.Cl.C07K16/18(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/70(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P25/28(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图3页(54)发明名称一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用(57)摘要一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用，属于基因工程抗体技术领域。本发明提供了一种包括重链可变区、轻链可变区的人源性抗Aβ42寡聚体的催化性单链抗体HS72，其氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。同时提供了一种核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的编码催化性单链抗体HS72的基因，以及该基因与pET‑28a、pET‑41b、pMA5、pPZW103等载体构建的基因工程表达载体。该催化性单链抗体能特异性识别、结合并降解Aβ42寡聚体，从而降低Aβ42寡聚体的水平，有效降低Aβ42寡聚体的细胞毒性，可应用于制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或制备抗阿尔茨海默氏病的药物。CN115925923ACN115925923A权利要求书1/1页1.一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72，其特征在于：单链抗体HS72的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。2.权利要求1所述的催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。3.一种编码权利要求1所述的催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体HS72的基因，其特征在于：基因的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。4.权利要求4所述的基因在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。5.一种基因工程表达载体，其特征在于：是由核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的基因与pET‑28a、pET‑41b、pMA5或pPZW103载体构建的催化性单链抗体HS72的表达载体。6.权利要求5所述的基因工程表达载体在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。2CN115925923A说明书1/6页一种催化Aβ42寡聚体降解的单链抗体、单链抗体基因及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程抗体技术领域，具体涉及一种特异性催化β‑淀粉样蛋白(Aβ42)寡聚体降解的催化性单链抗体和编码该单链抗体的基因，及其在制备抗神经毒性Aβ42寡聚体的药物或在制备抗阿尔茨海默氏病的药物中的应用。背景技术[0002]阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)是一种神经退行性疾病，其主要的和始发的病理特征是渐进性的Aβ42的聚集与沉积。对于AD的发病机理有多种观点，其中普遍认同的是Aβ42聚集体毒性学说。现已证明，由Aβ42单体聚集形成的Aβ42寡聚体最具有神经毒性，是导致AD发生、发展的主要致病因子。然而，目前国际上报道的抗毒性Aβ42的抗体大多是针对Aβ42的一级序列的，这些抗体与Aβ42的聚集体(Aβ42的寡聚体、原纤维或纤维统称为Aβ42聚集体)均能结合，无法特异地(或专一地)结合Aβ42寡聚体并抑制它们的毒性，因而在AD的治疗中易引起较大的副作用。另外，已报道的特异性靶向Aβ42寡聚体或原纤维的抗体虽然可特异性识别并结合特定的Aβ42聚集体，但不能同时有效地催化Aβ42寡聚体的降解，无法彻底根除Aβ42寡聚体的毒性。[0003]有关AD的被动免疫治疗报道中，很多是采用人源化的单克隆抗体，但这些抗体因分子大不易穿过血脑屏障或特异性差易引起副作用而限制了其在临床上的应用。为克服这些限制，从构建小分子的人源性单链抗体出发，筛选特异性靶向神经毒性Aβ42寡聚体并催化其降解的催化性单链抗体将会成为治疗AD的热点。[0004]单链抗体(singlechainFv,scFv)是一种小分子的基因工程抗体，它是在DNA水平上利用基因工程方法将天然抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段链接肽(Linker)连接而成的小分子重组抗体。与完整抗体分子相比，它具有以下特点：含有完整的抗体可变区，具有较完整的抗原结合位点；不含有抗体分子的Fc段，因而免疫原性弱，用于人体不易产生免疫反应；分子量小，穿透力强，易穿过血脑屏障，适用于AD的诊断或治疗；体内循环半衰期短，易从血