一种抗VEGFR2的单链抗体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105601743A(43)申请公布日2016.05.25(21)申请号201610068209.0(22)申请日2016.02.01(71)申请人苏州普罗达生物科技有限公司地址215000江苏省苏州市高新区竹园路209号(72)发明人罗瑞雪(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P3/10(2006.01)A61P27/02(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表2页(54)发明名称一种抗VEGFR2的单链抗体及其应用(57)摘要本发明公开了一种经过体外亲和力成熟的全人源的抗KDR单链抗体RD，具体为一种抗血管内皮生长因子受体2的单链抗体，其特征在于：所述的重链可变区域的氨基酸序列为SEQIDNO:1；轻链可变区域为SEQIDNO:2的氨基酸序列。本发明的单链抗体可特异性结合于血管内皮生长因子受体2，可以抑制VEGF诱导的HUVEC的生长，可应用于治疗以血管内皮生长因子受体的表达，特别是过量表达为特征的疾病提供了基于抗体的疗法，相关疾病包括但不限于癌症和视网膜黄斑病变等糖尿病并发眼部疾病。CN105601743ACN105601743A权利要求书1/1页1.一种抗VEGFR2的单链抗体，其特征在于：所述的重链可变区域的氨基酸序列为SEQIDNO:1；轻链可变区域为SEQIDNO:2的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的一种抗VEGFR2的单链抗体制备治疗以血管内皮生长因子受体的过量表达为特征的疾病药物中的应用，其中所述的疾病为癌症、视网膜黄斑病变和糖尿病并发眼部疾病。2CN105601743A说明书1/3页一种抗VEGFR2的单链抗体及其应用[0001]技术领域[0002]本发明属于生物工程领域，具体涉及一种全新的可与血管内皮生长因子受体2（vascularendothelialgrowthfactorreceptor,VEGFR2）特异结合的高亲和力全人源单链抗体，能抑制VEGF诱导的血管内皮细胞（humanumbilicalvascularendothelialcell,HUVEC）的增殖，是一种具有抗血管生成活性的基因工程抗体。背景技术[0003]癌细胞在生长因子受体的激活下增殖，癌细胞生长时会促进自身促血管生长因子如血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）等的表达上调，刺激内皮细胞活化，分泌出其他血管生成所需要的蛋白酶，引起一系列的级联反应，通过抗凋亡等机制调节内皮细胞的存活，促进新生血管形成并维持其完整性。内皮细胞在VEGF等刺激因子作用下增殖，大量增殖的内皮细胞重新排列形成条索状，刺激成纤维细胞分泌细胞外基质，形成新的血管。人VEGF受体2（VEGFR-2），又称为KDR（kinaseinsertdomain-containingreceptor，KDR）是VEGF的主要信号传导受体，其参与新生血管内皮细胞的迁移、增殖、生存，在肿瘤周围血管新生过程中具有重要的作用。因此，抑制VEGF/VEGFR-2途径是抑制肿瘤转移及生长的重要途径。[0004]KDR作为一种酪氨酸激酶受体，由一个胞外结构域，一个跨膜结构域和一个胞质内酪氨酸激酶结构域组成，其胞外有7个胞外免疫球蛋白样区，其中3区（含有97个氨基酸）对VEGF的紧密结合部位贡献最为突出。前期工作中以KDR胞外3区（KDR3）为靶抗原，利用噬菌体展示技术从Griffin.1单链抗体库中筛选出了具有单链抗体。发明内容[0005]发明目的本发明基于具有提高体外亲和力的单链抗体突变体库的构建，提供一种具有潜在医学和药学价值的全人源的抗KDR3的高亲和力单链抗体。[0006]技术方案一种抗血管内皮生长因子受体2的单链抗体，其特征在于：所述的重链的氨基酸序列为SEQIDNO:1，即ARRGDQVVESGGBSSAAPRLRSCTTFFLCCCSRGDDD；轻链为SEQIDNO:2的氨基酸序列，即LSPTSTTAPPFFTQQQSFGVQ。[0007]上述的抗体选择性地与VEGFR-2结合或抑制VEGF与VEGFR-2的结合或中和VEGF。[0008]所述的一种抗VEGFR2的单链抗体制备治疗以血管内皮生长因子受体的过量表达为特征的疾病药物中的应用，其中所述的疾病为癌症、视网膜黄斑病变和糖尿病并发眼部疾病。[0009]有益效果：3CN105601743A说明书2/3页本发明基于具有提高体外亲和力的单链抗体突变体库的构建，提供一种具有潜在医学和药学价值的全人源的抗KDR3的高亲和力单链抗体，获得单链抗体RD高亲和力和更强的抑制VEGF诱导的HUVE