一种酪醇衍生物及其制备方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115947771A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202210821496.3(22)申请日2022.07.12(71)申请人华中科技大学地址430074湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号(72)发明人卢丽丽孙桐(74)专利代理机构济南金迪知识产权代理有限公司37219专利代理师孙振家(51)Int.Cl.C07H15/18(2006.01)A61P25/00(2006.01)C12N9/24(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12P19/46(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表（电子公布）附图6页(54)发明名称一种酪醇衍生物及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及一种酪醇衍生物及其制备方法与应用。所述酪醇‑α‑半乳糖苷的制备方法包括：构建蜜二糖浓度为0.25～1.5M、酪醇浓度为10～500mM、α‑半乳糖苷酶浓度为1.25～10U/mL的反应体系，然后在40～75℃条件下反应0.5～6h，升温至90～100℃终止反应，离心，将上清液真空冷冻干燥后，经分离制得酪醇‑α‑半乳糖苷；所述α‑半乳糖苷酶的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明提供的酪醇‑α‑半乳糖苷对于神经炎症具有抑制作用，可作为新的治疗神经炎症的先导化合物。并且本发明是采用特定的α‑半乳糖苷酶，以蜜二糖为糖基供体，一步高效合成酪醇‑α‑半乳糖苷，条件温和，环保绿色，步骤简单，大大降低了生产成本，应用前景广阔。CN115947771ACN115947771A权利要求书1/1页1.一种酪醇‑α‑半乳糖苷，其特征在于，所述的酪醇‑α‑半乳糖苷的分子式为C14H20O7，化学结构式如下：2.权利要求1所述酪醇‑α‑半乳糖苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：构建蜜二糖浓度为0.25～1.5M、酪醇浓度为10～500mM、α‑半乳糖苷酶浓度为1.25～10U/mL的反应体系，然后在40～75℃条件下反应0.5～6h，升温至90～100℃终止反应，离心，将上清液真空冷冻干燥后，经分离制得酪醇‑α‑半乳糖苷；所述α‑半乳糖苷酶的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应体系中蜜二糖浓度为0.5M。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应体系中酪醇浓度为25mM。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应体系中α‑半乳糖苷酶浓度为1.25U/mL。6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述分离具体过程为：用硅胶柱进行色谱分离，以甲醇和乙酸乙酯为流动相，体积比例为1:6，样品上样量为5g冻干样品，洗脱流速为4～6mL/min，收集80min后的洗脱样品，再通过薄层层析检测合并产物，得到酪醇‑α‑半乳糖苷。7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述α‑半乳糖苷酶的制备方法如下：(1)将如SEQIDNo.1所示的α‑半乳糖苷酶基因序列克隆到大肠杆菌表达载体pET‑35b中，构建重组表达载体pET‑35‑aga，然后将表达载体转化到大肠杆菌中，用卡那霉素抗性筛选出含α‑半乳糖苷酶的重组菌株；(2)将步骤(1)筛选出的重组菌株接种于LB液体培养基中，在37℃、200rpm下培养过夜，获得种子液；将种子液按照体积比0.5～1.5％接种于LB液体培养基中，待生长到OD600为0.6时，加入终浓度为0.5～1.5mM的IPTG进行诱导，得到诱导后的菌细胞；(3)收集步骤(2)诱导后获得的菌细胞，超声破碎后，离心获得包涵体沉淀，即为α‑半乳糖苷酶。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述IPTG的终浓度为1mM，诱导温度为16℃，诱导时间为12h。9.权利要求1所述酪醇‑α‑半乳糖苷在制备缓解神经炎症药物中的应用。2CN115947771A说明书1/5页一种酪醇衍生物及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及一种酪醇衍生物及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。背景技术[0002]糖类具有重要的生理和药理功能，开发糖类药物及药物的糖基化修饰是创新药物研发的重要方向之一。对药物进行糖基化修饰可以提高药物的溶解度、降低毒副作用。例如，糖基化雷帕霉素和咖啡酸苯乙酯显著提高水溶性，几乎完全消除了细胞毒性。糖基化修饰还可以提高药物疗效、延长半衰期。例如，将含唾液酸的糖结构引入蛋白类药物分子上，会增加其体内活性和延长作用时间，克服活性低或快速被清除的缺点。此外，选择一些特殊的糖结构进行修饰还可以提高药物的靶向性，将药物递送至特定的细胞或器官中。例如对药物进行半乳糖基化修饰可以提高药物对肝细胞的靶向性。[0