一种重组环状人生长激素-Fc融合蛋白及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960246A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202111193142.0C12N1/21(2006.01)(22)申请日2021.10.13A61K38/27(2006.01)A61P5/06(2006.01)(71)申请人北京志道生物科技有限公司C12R1/19(2006.01)地址102206北京市昌平区回龙观镇北农路7号科技综合楼A0928室（昌平示范园）(72)发明人高翔黄英姿王国永张建军张玉张秋磊(74)专利代理机构北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙)11535专利代理师刘元霞彭劲松(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)权利要求书1页说明书14页序列表7页附图5页(54)发明名称一种重组环状人生长激素-Fc融合蛋白及其应用(57)摘要本发明公开了一种重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白及其应用。所述融合蛋白使用两个连接肽由N端至C端将Fc片段、人生长激素、Fc片段依次连接起来形成一个分子，两个Fc片段折叠完成后形成1对或者更多对二硫键或不形成二硫键，构成环状Fc‑hGH‑Fc。所述环状Fc‑hGH‑Fc融合蛋白复性比率较单体Fc/Fc‑hGH表达复性的产率高，形成的Fc/Fc同源二聚体及双体的hGH‑Fc/hGH‑Fc的形式较少，为后期的纯化提供便利。本发明融合蛋白发酵制备工艺过程简单，纯化方便，产量高，成本低。本发明的融合蛋白通过使用Fc的空间位阻效应减弱了生长激素受体导致的蛋白清除效应，进一步延长了药物的半衰期和增加药效。CN115960246ACN115960246A权利要求书1/1页1.一种重组人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc，其特征在于，所述融合蛋白由人生长激素、两个连接肽和两个相同或者不同的Fc片段组成，即使用两个连接肽由N端至C端依次将第一个Fc片段、人生长激素、第二个Fc片段依次连接起来形成一个分子，其中一个连接肽存在于第一个Fc片段和人生长激素之间，另一个连接肽存在于人生长激素和第二个Fc片段之间，两个连接肽的氨基酸序列为相同或不同，两个Fc片段折叠完成后形成由1对或者更多对二硫键或者没有二硫键的二聚体，构成环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc。2.根据权利要求1所述的融合蛋白Fc‑hGH‑Fc，其特征在于，所述Fc片段选自人IgG的Fc片段，优选为人IgG4或IgG1的Fc片段；进一步优选为人IgG4的Fc片段。3.根据权利要求1所述的融合蛋白Fc‑hGH‑Fc，其特征在于，所述两个连接肽的氨基酸数目之和≥5，所述连接肽为氨基酸构成的柔性多肽，优选的氨基酸类型为Asp，Glu，Gly，Pro，Ala，Ser，Thr，Asn，Gln，His。4.根据权利要求1所述的融合蛋白Fc‑hGH‑Fc，其特征在于，所述重组人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。5.权利要求1‑4任一项所述的重组人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的DNA分子。6.一种包含权利要求5所述的DNA分子的表达载体，其特征在于，所述载体为真核或原核细胞表达载体。7.一种包含权利要求6所述的表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述细胞选自真核细胞或原核细胞；优选为大肠杆菌。8.一种生产权利要求1‑4任一项所述重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的方法，包括如下步骤：(a)在适合表达的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞，获得含表达环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的培养液；(b)从所述培养液中分离出环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc；优选地，在步骤(b)中，所述的分离包括：菌体经高压破碎，两次PBS缓冲液洗涤，回收包涵体；包涵体破碎和洗脱，确保上清中没有目的蛋白；融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的复性过程；融合蛋白Fc‑hGH‑Fc的纯化。9.一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的权利要求1‑4任一项所述重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc和药学可接受的载体。10.权利要求1‑4任一项所述重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白Fc‑hGH‑Fc或权利要求9所述的药物组合物在制备治疗生长激素缺乏相关疾病药物中的应用。2CN115960246A说明书1/14页一种重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程药物领域，具体涉及一种重组环状人生长激素‑Fc融合蛋白及其应用。背景技术[0002]人生长激素(humangrowthhormone，简称hGH)是一种多肽类激素(SEQIDNO:1)，它是由垂体中的生长激素细胞合