非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白及其制备方法和用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114933639A(43)申请公布日2022.08.23(21)申请号202210481435.7A61K39/12(2006.01)(22)申请日2022.05.05A61P31/20(2006.01)C12R1/19(2006.01)(71)申请人中国农业科学院兰州兽医研究所地址730046甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪1号(72)发明人邵军军李俊惠刘伟常惠芸(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139专利代理师马鑫(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C07K19/00(2006.01)C12N15/70(2006.01)G01N33/569(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书13页序列表4页附图2页(54)发明名称非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白及其制备方法和用途。所述的p72N抗原表位蛋白选自p72N1～p72N11抗原表位蛋白中的任意一种或是由p72N1～p72N11抗原表位蛋白中任意两种以上串联后得到的多表位蛋白，所述的p72N1～p72N11抗原表位蛋白的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1～11所示。本发明以我国分离的ASFVpig/HLJ/2018毒株的主要结构蛋白p72N为对象，利用生物信息学技术结合免疫学方法，预测、筛选ASFV的抗原表位，绘制这些蛋白的抗原表位图谱，最终确定了11个抗原表位(肽)为非洲猪瘟病毒p72N蛋白的抗原表位。这些候选抗原表位的获得，极大了节省了传统抗原表位筛选的成本和时间，提高了免疫学方法验证具有良好免疫保护功能的抗原表位的效率，对研发ASF新型疫苗和检测技术具有十分重要的意义。CN114933639ACN114933639A权利要求书1/1页1.非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白，其特征在于，所述的p72N抗原表位蛋白选自p72N1、p72N2、p72N3、p72N4、p72N5、p72N6、p72N7、p72N8、p72N9、p72N10、p72N11抗原表位蛋白中的任意一种或是由p72N1、p72N2、p72N3、p72N4、p72N5、p72N6、p72N7、p72N8、p72N9、p72N10、p72N11抗原表位蛋白中任意两种以上串联后得到的多表位重组蛋白，所述的p72N1、p72N2、p72N3、p72N4、p72N5、p72N6、p72N7、p72N8、p72N9、p72N10、p72N11抗原表位蛋白的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1‑11所示。2.如权利要求1所述的非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白，其特征在于，所述的p72N抗原表位蛋白的一端与GST标签连接。3.如权利要求1所述的非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白，其特征在于，所述的p72N抗原表位蛋白是由p72N1、p72N7抗原表位蛋白串联后，相邻抗原表位间引入间隔子序列GGGS，然后将其编码基因序列与噬菌体AP205基因分别依次克隆至线性化的原核表达载体pET‑28a(+)，构建噬菌体展示多表位的重组表达质粒，通过大肠杆菌表达得到的GST‑多表位重组蛋白。4.权利要求1‑3任一项所述的非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白在制备检测非洲猪瘟病毒抗体试剂中的用途。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的试剂为ELISA检测试剂。6.一种非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有权利要求1‑3任一项所述的非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白。7.如权利要求6所述的非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还含有稀释液、洗涤液、封闭液、HRP标记山羊抗猪IgG抗体、显色液以及终止液。2CN114933639A说明书1/13页非洲猪瘟病毒p72N抗原表位蛋白及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种抗原表位蛋白及其制备方法和用途，特别涉及一种非洲猪瘟病毒p72抗原表位蛋白及其制备方法和用途。本发明属于生物医药技术领域。背景技术[0002]非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)感染猪引起的一种急性烈性传染病，死亡率高达100％。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报动物疫病，我国列为重点防范的一类动物传染病。[0003]非洲猪瘟病毒作为一个有百年历史的重要动物病毒，对疫苗的研究从未间断，但至今仍然缺乏可用于防控实践安全、有效、可鉴别诊断的疫苗。[0004]针对非洲猪瘟病毒及其复杂，保护性抗原/抗原表位谱不详，已成为制约基因工程疫苗研究的关键科