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本发明属于动物转染病及基因工程技术领域,公开了一种非洲猪瘟病毒P72蛋白C末端多表位重组抗原及应用,所述非洲猪瘟病毒P72蛋白C末端多表位重组抗原基因P72?B的核苷酸序列为SEQIDNO:1;所述非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原表位基因序列表达载体的构建方法包括:根据P72?B基因序列,设计引物P72?BF和P72?BR并合成,以合成的P72?B基因序列为模版进行PCR扩增;将纯化回收的P72?B基因序列用BamHI和XhoI双酶切,用BamHI和XhoI双酶切质粒载体Pet28a,将P72?B序列片段同质粒载体Pet28a进行连接。本发明为非洲猪瘟的诊断及免疫反应研究提供重要帮助。