一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115980341A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211675641.8(22)申请日2022.12.26(71)申请人南京珀尔泰生物技术有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区仙林街道仙林大学城纬地路9号F7栋417室(72)发明人李伟唐小艳(74)专利代理机构南京新慧恒诚知识产权代理有限公司32424专利代理师王月霞(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/532(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条及其制备方法，所述试纸条结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，其特征在于，硝酸纤维素膜（NC膜）上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体M7413作为检测线；所述金标垫喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明试纸条检测灵敏度为0.01ng/ml，检出限更低，更为精确，15min快速读数。CN115980341ACN115980341A权利要求书1/1页1.一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，所述试纸条结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，其特征在于，硝酸纤维素膜（NC膜）上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体M7413作为检测线；所述金标垫喷有降钙素原单克隆抗体M7413的标记金；所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。2.根据权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线性范围为0.01ng/ml~600ng/ml。3.根据权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条中羊抗鼠IgG多克隆抗体的含量0.7‑1.0mg/ml，降钙素原单克隆抗体M7413的含量0.5‑1.2mg/ml。4.权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在PVC底板上，固定贴合；（2）将降钙素原单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体采用划膜机划在NC膜上固定，置于37℃的烘箱中烘干2h备用；（3）标记金过程：取15ml金水，加入适量的K2CO3调节金水pH8.5‑10.0，加入降钙素原PCT单克隆抗体M7413进行标记25~40min，之后再加入10%质量分数的BSA进行封闭25~40min，置于离心机8000~10000rmp离心25~40min，取出后去掉上清液，吸出标记好降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；加入80‑100ul的PCT金标稀释液，测量OD，计算后并采用喷金仪喷在提前准备好的金标垫上，放烘箱37℃烘干1‑2h备用；（4）将吸水垫、喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金的金标垫与样品垫依次组成一起，再用胶带将样品垫与金标垫粘起来，压实，剪裁为合适大小密封保存。5.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述金水为氯金酸与柠檬酸三钠反应制备得到。6.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤2）中降钙素原单克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。7.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤2）中羊抗鼠IgG多克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。8.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤3）中调节金水pH为9.4。9.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤4）中剪裁为3mm*80mm。2CN115980341A说明书1/4页一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条及其制备方法技术领域[0001]本发明属于免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条。背景技术[0002]降钙素原(Procalcitonin，P