一种肿瘤标志物胶体金免疫层析定量检测试纸条及制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101900733A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN101900733A(43)申请公布日2010.12.01(21)申请号201010252425.3(22)申请日2010.08.13(71)申请人中南大学地址410083湖南省长沙市岳麓区麓山南路932号(72)发明人陈真诚方成朱健铭(74)专利代理机构长沙市融智专利事务所43114代理人颜勇(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/544(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称一种肿瘤标志物胶体金免疫层析定量检测试纸条及制备方法(57)摘要本发明公开了一种肿瘤标志物胶体金免疫层析定量检测试纸条及制备方法。包括样品垫、金标抗体结合物膜、硝酸纤维膜、吸水垫、反应支持物。所述的硝酸纤维膜以靠近样品垫一端为起始端，靠近吸水垫一端为末端，依次包被5条抗体条带，分别为包被鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ的T1、T2、T3、T4检测条带和包被羊抗鼠IgG的C质控条带，金标抗体结合物膜为喷涂有胶体金标记的鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ的膜。本发明实现了肿瘤标志物的快速、准确的定量检测，从而满足了应对癌症普查筛选和家庭癌症预后监测等快速检测的需要。CN10973ACN101900733A权利要求书1/2页1.一种肿瘤标志物胶体金免疫层析定量检测试纸条，包括样品垫、金标抗体结合物膜、硝酸纤维膜、吸水垫、反应支持物，反应支持物位于底层，硝酸纤维膜位于反应支持物上的中部，金标抗体结合物膜位于硝酸纤维膜上部的一侧并与之部分重叠；吸水垫位于硝酸纤维膜上相对于金标抗体结合物膜而言的另一侧并与硝酸纤维膜部分重叠；样品垫位于硝酸纤维膜上与吸水垫相反的一侧并与金标抗体结合物膜部分重叠；其特征在于，所述的硝酸纤维膜以靠近样品垫一端为起始端，靠近吸水垫一端为末端，依次包被5条抗体条带，分别为包被鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ的T1、T2、T3、T4检测条带和包被羊抗鼠IgG单克隆抗体的C质控条带，金标抗体结合物膜为喷涂有胶体金标记的鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ的膜。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的每条抗体条带上鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ的包被量为0.3-1.5ug，羊抗鼠IgG纯化抗体的包被量为0.15-0.75ug。3.根据权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述的每条抗体条带之间有3mm的平行间隔，所述的硝酸纤维膜的宽度为0.3cm。4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，每8-15ug鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ采用1mlOD520nm值为1.5～2.0的胶体金溶液标记，胶体金颗粒直径为40nm。5.根据权利要求2或4所述的试纸条，其特征在于，所述的金标抗体结合物膜上胶体金标记的鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ的用量为5-10ul。6.根据权利要求1或2或4所述的试纸条，其特征在于，所述的鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ包括游离态前列腺特异抗原fPSA、复合态前列腺特异抗原cPSA、前列腺酸性磷酸酶PAP、核基质蛋白22NMP-22、膀胱癌抗原UBC或膀胱肿瘤抗原BTA的单克隆抗体；所述的鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ包括与鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ所述的各种抗体表位不同的单克隆抗体中的一种。7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的样品垫选自聚脂膜或玻璃纤维；所述的金标抗体结合物膜选自聚脂膜或玻璃纤维或滤纸纤维；吸水垫选用滤纸；反应支持物选用PVC板。8.权利要求1所述的肿瘤标志物胶体金免疫层析定量检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅰ工作浓度为0.5-1mg/ml；以羊抗鼠IgG工作浓度为0.5-2.5mg/ml；以1ul/cm的量依次定量喷涂T1、T2、T3、T4、C五条抗体条带于硝酸纤维膜上，每条抗体条带之间有3mm的平行间隔；真空干燥；室温晾干后于封闭液中浸泡烘干，封存备用；(2)以1mlOD520nm值为1.5～2.0的胶体金溶液标记8-15ug鼠抗人肿瘤标志物单克隆抗体Ⅱ，胶体金颗粒直径为40nm；以0.1ml/cm的涂布量喷涂在膜上；并烘干或冷冻干燥后，制成金标抗体结合物膜；(3)将反应支持物置于底层，将步骤(1)制得的硝酸纤维膜置于反应支持物上的中部，将步骤(2)制得的金标抗体结合物膜置于硝酸纤维膜上靠近T1检测条带的一侧并与之部分重叠；吸水垫置于硝酸纤维膜上相对于金标抗体结合物膜而言的另一侧并与硝酸纤维膜部分重叠；样品垫置于硝酸纤维膜上与吸水垫相反的一侧并与金标抗体结合物膜部分重叠；组装，切取，即可。2CN101900733A权利要求书2/2页9.根据权利要求8所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述的样品垫选