软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102680693A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102680693A(43)申请公布日2012.09.19(21)申请号201210157875.3(22)申请日2012.05.18(71)申请人上海交通大学地址200240上海市闵行区东川路800号(72)发明人程金平皮帅帅高利利席磊余朝毅唐庆丽程芳(74)专利代理机构上海汉声知识产权代理有限公司31236代理人郭国中(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书66页页附图附图11页(54)发明名称软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条及其制备方法；所述试纸条包括粘附在支撑板上并依次相互部分重叠的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述胶体金结合垫上含有抗软骨藻酸单克隆抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上分别包被有软骨藻酸-牛血清蛋白偶联物构成的检测线和羊抗鼠IgG构成的质控线。本发明的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条，具有特异性强、检测灵敏度高，检测快速,前处理简单等优点；检测时不需要任何特殊仪器、设备，检测成本低。CN1026893ACN102680693A权利要求书1/1页1.一种软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条，包括样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和支撑板，其特征在于，所述样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫粘附在所述支撑板上并依次相互部分重叠；所述胶体金结合垫上含有抗软骨藻酸单克隆抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上分别包被有软骨藻酸-牛血清蛋白偶联物构成的检测线和羊抗鼠IgG构成的质控线。2.根据权利要求1所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的检测线和质控线相隔3mm～7mm。3.根据权利要求1所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条，其特征是，所述的软骨藻酸单克隆抗体为抗软骨藻酸杂交瘤细胞株2B1No.9-2-2分泌的单克隆抗体。4.根据权利要求1所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述支撑板为PVC塑料板。5.一种如权利要求1所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制备软骨藻酸单克隆抗体；步骤二、将胶体金与步骤一制得的抗软骨藻酸单克隆抗体按照1∶（0.01～0.02）的体积比混匀，经纯化和浓缩后产生抗软骨藻酸单克隆抗体-胶体金标记物；步骤三、将步骤二制得的抗软骨藻酸单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在胶体金结合垫上，将软骨藻酸-牛血清蛋白偶联物喷点在硝酸纤维素膜上构成检测线，再将羊抗鼠IgG喷点在硝酸纤维素膜上构成质控线，最后将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫粘附在所述支撑板上并依次相互部分重叠，干燥，即得。6.根据权利要求5所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤一具体为：采用抗软骨藻酸杂交瘤细胞株2B1No.9-2-2分泌得到软骨藻酸单克隆抗体。7.根据权利要求5所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的胶体金是采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备而得的。8.根据权利要求5所述的软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤三中的软骨藻酸-牛血清蛋白偶联物是采用碳二亚胺法、活泼酯法或混合酸酐法将软骨藻酸小分子半抗原与牛血清蛋白进行偶联得到的。2CN102680693A说明书1/6页软骨藻酸胶体金免疫层析试纸条及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及的是一种生物检测技术领域的试纸条及其制备，具体是一种用于快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。背景技术[0002]记忆缺失性贝毒（ASP）是有毒赤潮硅藻分泌产生的毒素，其主要活性成分软骨藻酸（DomicAcid,DA）是一种氨基酸类毒素。海洋贝类通过食物链的传递作用可在体内累积DA，有毒藻类也可以直接释放DA到海水中，人和海洋哺乳动物中毒之后，会干扰中枢神经系统，发生暂时性失去记忆甚至死亡。虽然目前在我国贝类食品中还未检测出软骨藻酸，但由于水污染的不断加剧，近年来赤潮频繁发生，极有可能伴随软骨藻酸的污染。所以在我国开展记忆缺失性贝毒快速检测技术研究具有特殊的意义，这既关系到消费者的健康安全又关系到我国贝类养殖业的发展。目前应用广泛、方法完善的检测分析软骨藻酸的方法仍然为高效液相色谱法，但由于其操作繁琐，设备昂贵，测定时间较长，使其推广普及受到一定的限制。免疫化学方法是利用抗体对抗原的特异性结合建立的分析方法，具有灵敏度高，特异性强，仪器设备简单易操作、样品前处理相对简单等优点，适用于一定条件下的现场监测和大量样本快速筛查，因而近年来在分析化学领域受到极大的重视和迅速发展。[0003