一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115992057A(43)申请公布日2023.04.21(21)申请号202211341558.7A62D3/02(2007.01)(22)申请日2022.10.28A62D101/28(2007.01)C12R1/865(2006.01)(71)申请人江南大学地址214000江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人徐国强刘燕余施雨刘含章唐美达张晓娟张晓梅李会柴丽娟陆震鸣史劲松许正宏(74)专利代理机构无锡承果知识产权代理有限公司32373专利代理师肖昂(51)Int.Cl.C12N1/19(2006.01)C12N15/52(2006.01)C12N15/81(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建及应用(57)摘要本发明公开了一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建及应用，对甲基苯酚是浓香型白酒产生泥臭味的主要化合物，本发明以酿酒酵母CEN.PK2‑1C为宿主，异源表达谷氨酸棒杆菌13032中降解对甲基苯酚的关键酶4‑甲基苯基磷酸酯合成酶，该酶由两个基因creI和creH编码，重组酿酒酵母能够有效地降解培养基中添加的对甲基苯酚，通过增强creIH基因的表达水平，成功提高了重组酿酒酵母降解对甲基苯酚的效率，本研究为如何消减对甲基苯酚提供了理论支持，对解决对甲基苯酚引起的异嗅味问题、提升白酒品质具有重要意义。CN115992057ACN115992057A权利要求书1/1页1.一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株，其特征在于，该重组酿酒酵母菌株中外源基因包含有4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因，所述4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因包括：(a)creI基因，核苷酸序列如SEQ.NO.1所示，(b)creH基因，核苷酸序列如SEQ.NO.2所示。2.一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建方法，其特征在于，以酿酒酵母为宿主，异源表达降解对甲基苯酚的4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因，所述4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因包括：(a)creI基因，核苷酸序列如SEQ.NO.1所示，(b)creH基因，核苷酸序列如SEQ.NO.2所示。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述降解对甲基苯酚的4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因来源于谷氨酸棒杆菌；所述降解对甲基苯酚的4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creI和creH基因进行串联表达。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述4‑甲基苯基磷酸酯合成酶creIH基因以重组质粒的形式转入酿酒酵母菌株，构建降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述重组质粒的构建方法包括：creIH基因经PCR扩增、融合表达，以prs305为初始质粒，构建重组质粒prs305‑creIH或prs305&306‑creIH。6.重组质粒，其特征在于，根据权利要求2‑5任一项所述的构建方法过程中得到，所述重组质粒包括prs305‑creIH或prs305&306‑creIH。7.如权利要求1所述的重组酿酒酵母菌株，或如权利要求2‑4任一项所述方法构建的重组酿酒酵母菌株，在降解对甲基苯酚中的应用。8.一种降解对甲基苯酚的方法，其特征在于，将权利要求1所述的重组酿酒酵母菌株，或如权利要求2‑4任一项所述方法构建的重组酿酒酵母菌株，接入种子培养基活化，再接种于发酵培养基中进行发酵培养。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中包含5mg/L～20mg/L对甲基苯酚。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述种子培养基为YPD培养基，所述发酵培养基为YPD培养基或RCM培养基。2CN115992057A说明书1/6页一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建及应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种降解对甲基苯酚的重组酿酒酵母菌株的构建及应用。背景技术[0002]浓香型白酒作为白酒中的重要代表，其感官风味认同感及市场份额(70％以上)均在白酒行业占据主导地位。浓香型白酒又被称为泸型酒，以独特的“香味协调，绵甜醇厚，窖香浓郁，尾净爽口”的酒体风格深受大众喜爱。[0003]众所周知，浓香型白酒特色工艺是采用泥窖固态发酵。窖泥中富含丰富的酿造微生物，这些微生物以窖泥为基地，进行代谢活动，产生的一些代谢物质(如己酸、己酸乙酯等)会通过糟醅蒸馏进入酒中，成为浓香型白酒的关键风味物质，进而影响浓香型白酒的质量和风格。然而，一些不好的风味如泥臭味也会进入酒体，这对浓香型白酒风味影响很大，会影响消费者的情绪，在一定程度上阻碍了白酒品质的进一步提升。[0004]目前