一种降解甲基汞的重组菌株及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115895986A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202210874009.XC12R1/19(2006.01)(22)申请日2022.07.21(83)生物保藏信息CGMCC252042022.06.27(71)申请人中国科学院生态环境研究中心地址100085北京市海淀区双清路18号(72)发明人阴永光杨青青郭瑛瑛向玉萍(74)专利代理机构中科专利商标代理有限责任公司11021专利代理师乔献丽(51)Int.Cl.C12N1/21(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N15/60(2006.01)权利要求书1页说明书13页A62D3/02(2007.01)序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种降解甲基汞的重组菌株及其构建方法和应用(57)摘要本发明涉及一种降解甲基汞的重组菌株及其构建方法和应用，所述菌株包含merB基因和与所述merB基因可操作地连接的组成型启动子。其构建方法包括将包含merB基因序列和与所述merB基因序列可操作地连接的组成型启动子的表达载体导入宿主细胞例如大肠杆菌，经测序验证获得重组菌株。本发明的重组菌株可快速降解缺氧/有氧培养基中的甲基汞；对缺氧/有氧沉积物中新生成的甲基汞，具有较好的降解效果；沉积物中甲基汞的老化，尤其是有氧沉积物中甲基汞的老化会降低其生物可利用性从而降低重组菌株甲基汞降解效果，结合硫代硫酸铵提取可提高重组菌株对部分有氧沉积物中老化甲基汞的降解；本发明的重组菌株可用于原位直接降解或分离后异位降解沉积物中的甲基汞。CN115895986ACN115895986A权利要求书1/1页1.重组菌株，其能够降解甲基汞，其特征在于，所述重组菌株包含merB基因序列和与所述merB基因序列可操作地连接的组成型启动子。2.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述merB基因序列如SEQIDNO:9所示，任选地，所述组成型启动子选自BBa_J23119、BBa_J23104、BBa_J23105、BBa_J23106和BBa_J23107，所述BBa_J23119的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示，所述BBa_J23104的核苷酸序列如SEQIDNO:12所示，所述BBa_J23105的核苷酸序列如SEQIDNO:13所示，所述BBa_J23106的核苷酸序列如SEQIDNO:14所示，所述BBa_J23107的核苷酸序列如SEQIDNO:15所示，优选地，所述重组菌株为大肠杆菌。3.重组菌株，其能够降解甲基汞，其特征在于，所述重组菌株是大肠杆菌菌株，保藏号为CGMCCNo.25204。4.降解甲基汞的重组菌株的制备方法，其包括以下步骤：a.构建包含merB基因序列和与所述merB基因序列可操作地连接的组成型启动子的表达载体，任选地，所述组成型启动子选自BBa_J23119、BBa_J23104、BBa_J23105、BBa_J23106和BBa_J23107，所述BBa_J23119的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示，所述BBa_J23104的核苷酸序列如SEQIDNO:12所示，所述BBa_J23105的核苷酸序列如SEQIDNO:13所示，所述BBa_J23106的核苷酸序列如SEQIDNO:14所示，所述BBa_J23107的核苷酸序列如SEQIDNO:15所示；b.将所述表达载体导入宿主细胞例如大肠杆菌中；c.取阳性菌落进行菌落PCR，并测序验证，得到重组菌株。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述merB基因序列如SEQIDNO:9所示。6.重组菌株，其特征在于，所述重组菌株根据权利要求4或5所述的方法制备。7.菌剂，其特征在于，所述菌剂包含根据权利要求1‑3、6中任一项所述的重组菌株。8.根据权利要求1‑3、6中任一项所述的重组菌株或根据权利要求7所述的菌剂在降解甲基汞中的应用。9.降解甲基汞的方法，其特征在于，包括向待处理环境中施加根据权利要求1‑3、6中任一项所述的重组菌株或根据权利要求7所述的菌剂，任选地，所述待处理环境为缺氧或有氧环境，例如缺氧或有氧沉积物。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，降解缺氧或有氧沉积物中甲基汞的步骤包括：对于缺氧或有氧沉积物中新生成的甲基汞，加入所述重组菌株直接降解；对于沉积物中老化后的甲基汞，生物可利用性高的部分加入所述重组菌株直接降解；对沉积物中老化后的甲基汞生物可利用性低的部分加入硫代硫酸铵提取，提取后直接在沉积物‑硫代硫酸铵体系中加入所述重组菌株降解沉积物中的甲基汞，或将沉积物体系分离出提取液和沉积物固体，将所述重组菌株加入提取液中异位降解沉积物中的甲基汞。2CN115895986A说明书1/13页一种