一种TIGIT纳米抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003606A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202310002412.8C12N15/85(2006.01)(22)申请日2023.01.03C12N5/10(2006.01)G01N33/68(2006.01)(71)申请人上海百英生物科技股份有限公司地址200120上海市浦东新区周浦镇沈梅路99弄1-9号1幢101、106、201、301、401室(72)发明人张立凤杨燕于蒙郭淑梅王亮杜继文(74)专利代理机构广州科沃园专利代理有限公司44416专利代理师刘敏仪(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称一种TIGIT纳米抗体及其制备方法与应用(57)摘要本发明属于抗体制备领域，具体涉及一种TIGIT纳米抗体及其制备方法与应用。本发明的TIGIT纳米抗体，氨基酸序列为SEQIDNO.8、SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11中的一种。制备过程如下：构建TIGIT抗原对羊驼进行免疫，获得羊驼PBMC细胞；对细胞进行RNA的捕获，反转录为cDNA，进行PCR获得抗体基因片段，通过哺乳动物细胞高通量表达系统进行高通量表达；最后通过ELISA与FACS检测筛选获得TIGIT的纳米抗体。本发明的制备方法简便，且哺乳动物细胞表达系统诱导抗体高效表达，翻译后可进行加工修饰，其活性更接近于天然抗体。CN116003606ACN116003606A权利要求书1/1页1.一种TIGIT纳米抗体，其特征在于，所述TIGIT纳米抗体包括框架区和互补决定区，所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3，其中，所述互补决定区CDR1序列为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2序列为SEQIDNO.2，所述互补决定区CDR3序列为SEQIDNO.3；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.4，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.3；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.5，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.3；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.6，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.7。2.如权利要求1所述的TIGIT纳米抗体，其特征在于，所述TIGIT纳米抗体具有选自以下任一种的氨基酸序列：SEQIDNO.8、SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11。3.如权利要求2所述的TIGIT纳米抗体，其特征在于，编码所述TIGIT纳米抗体氨基酸序列的核苷酸序列为下列序列之一：SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15中的一种。4.一种分子表达载体，其特征在于，所述载体包含SEQIDNO.12～15的核苷酸序列中的一种。5.一种含有权利要求4所述分子表达载体的宿主细胞，起特征在于，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述哺乳动物细胞为HEK‑293细胞、CHO细胞中的一种。7.一种制备权利要求1‑3任一项所述TIGIT纳米抗体的方法，其特征在于，制备过程如下：S1、依据TIGIT的蛋白序列和基因序列信息，表达免疫抗原，并在其C端连接His‑tag，获得经修饰的氨基酸序列；S2、用步骤S1获得的经修饰的氨基酸序列对羊驼进行免疫，获得羊驼PBMC细胞；S3、以步骤S2获得的羊驼PBMC细胞为原材料，通过单个细胞微流控技术筛选获得能够分泌目标抗体的抗体分泌细胞，提取RNA，并反转录成cDNA，经PCR获得目的基因片段，并将目的基因片段克隆至真核表达载体中；S4、通过哺乳动物细胞高通量表达系统诱导步骤S3所述载体转染哺乳动物细胞进行高通量表达，进一步通过ELISA、FACS检测、Cellbindingassay检测筛选、测序分析，获得具有高的灵敏度和特异性的抗体。8.一种权利要求1所述TIGIT纳米抗体在制备检测T细胞表面蛋白试剂中的应用。9.一种权利要求1所述TIGIT纳米抗体在制备治疗血液肿瘤和实体瘤药物中的应用。2CN116003606A说明书1/4页一种TIGIT纳米抗体及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于抗体制备技术领域，具体涉及一种TIGIT纳米抗体及其制备方法与应用。背景技术[0002]T细胞表面具有很多重要的分子，它们对于T细胞的活化、增殖和分化以及效应功能的发挥具有重要的作用。TIGIT是近年来新发现的一