一种抗CD40纳米抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116023495A(43)申请公布日2023.04.28(21)申请号202211078773.2C12N5/10(2006.01)(22)申请日2022.09.05C07K16/00(2006.01)G01N33/68(2006.01)(71)申请人上海百英生物科技股份有限公司A61K39/395(2006.01)地址200120上海市浦东新区周浦镇沈梅A61P35/00(2006.01)路99弄1-9号1幢101、106、201、301、401室(72)发明人杜继文薛静杨燕袁亚丰许胤辉丁惠王玉芳查长春(74)专利代理机构广州科沃园专利代理有限公司44416专利代理师张帅(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/85(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称一种抗CD40纳米抗体及其制备方法与应用(57)摘要本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种抗CD40纳米抗体及其制备方法与应用。本发明提供的抗CD40纳米抗体具有独特的3个互补决定区，即CDR1、CDR2、CDR3，本发明还提供了编码上述纳米抗体或其VHH链的编码序列、相应的表达载体和能够表达该纳米抗体的宿主细胞。本发明首先通过构建CD40抗原对羊驼进行免疫，获得羊驼PBMC细胞构建载体；其次通过噬菌体展示系统筛选出Anti‑CD40抗体；最后通过功能检测及测序结果分析获得了具有高的灵敏度和特异性的抗体。本发明提供的纳米抗体对CD40具有特异的识别和结合能力。CN116023495ACN116023495A权利要求书1/2页1.一种抗CD40纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括框架区和互补决定区；所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3，氨基酸序列如下：其中，所述互补决定区CDR1序列为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2序列为SEQIDNO.2，所述互补决定区CDR3序列为SEQIDNO.3；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.4，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.5，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.6；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.1，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.7，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.8；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.9，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.10，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.11；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.12，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.13，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.14；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.12，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.15，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.16；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.17，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.18，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.19；或者所述互补决定区CDR1为SEQIDNO.9，所述互补决定区CDR2为SEQIDNO.20，所述互补决定区CDR3为SEQIDNO.21。2.如权利要求1所述的抗CD40纳米抗体，其特征在于，所述抗CD40纳米抗体具有选自以下任一种的氨基酸序列：SEQIDNO.22、SEQIDNO.23、SEQIDNO.24、SEQIDNO.25、SEQIDNO.26、SEQIDNO.27、SEQIDNO.28、SEQIDNO.29。3.如权利要求2所述的抗CD40纳米抗体，其特征在于，编码所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸序列为下列序列之一：SEQIDNO.30、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.33、SEQIDNO.34、SEQIDNO.35、SEQIDNO.36、SEQIDNO.37。4.一种分子表达载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述SEQIDNO.30~SEQIDNO.37的核苷酸序列中的一种。5.一种含有权利要求4所述分子表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述细胞为哺乳动物细胞、大肠杆菌、酵母菌中的一种。6.一种权利要求1‑3任一项所述抗CD40纳米抗体的制备方法，其特征在于，制备过程如下：S1、依据CD40的蛋白序列和基因序列信息，分析并设计可有效诱导羊驼产生针对humanCD40的特异性抗体的抗原；S2、用步骤S1获得的抗原与弗氏完全佐剂的混合液对羊驼进行免疫，获得羊驼PBMC细胞；S3、以步骤S2获得的羊驼PBMC细胞为原材料，提取RNA，并反转录成cDNA，经PCR获得目的基因片段，然后将目的基因片段克隆至载体中，并导入大肠杆菌，构建An