用于改进测定的化合物、组合物和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112189139A(43)申请公布日2021.01.05(21)申请号201980036497.3(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公(22)申请日2019.09.24司72001代理人罗文锋庞立志(30)优先权数据62/7365252018.09.26US(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日G01N33/58(2006.01)2020.11.30C12Q1/6806(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2019/0526222019.09.24(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/131182EN2020.06.25(71)申请人北卡罗来纳－查佩尔山大学地址美国北卡罗来纳州(72)发明人W·H·亨利E·A·德索夫J·M·拉姆齐权利要求书4页说明书23页附图18页(54)发明名称用于改进测定的化合物、组合物和方法(57)摘要提供用于改进测定比如多重PCR测定(例如多重免疫PCR测定)的化合物、组合物、试剂盒、系统、装置和方法。根据本发明的一些实施方案，可提供固体支持物(例如珠粒)。所述固体支持物可包含编码剂(例如染料)、核酸序列(例如寡核苷酸和/或引物)和分子识别元件(例如抗体)。根据本发明的一些实施方案，可提供检测试剂。所述检测试剂可包含分子识别元件(例如抗体)和核酸标签。在一些实施方案中，所述固体支持物的核酸序列的至少一部分和所述检测试剂的核酸标签的至少一部分配置成参与核酸扩增过程。固体支持物和检测试剂可结合于同一靶标，从而形成试剂对。CN112189139ACN112189139A权利要求书1/4页1.一种试剂盒，其包含：(i)固体支持物(例如珠粒)，其中所述固体支持物包含：编码剂(例如染料)；第一核酸序列(例如寡核苷酸和/或引物)；和第一分子识别元件(例如抗体)；和(ii)检测试剂，其包含第二分子识别元件(例如抗体)和第二核酸序列，其中第一核酸序列的至少一部分和第二核酸序列的至少一部分配置成参与核酸扩增过程。2.权利要求1的试剂盒，其中所述固体支持物进一步包含接头(例如特异性结合对的一个构件)并且所述接头在所述固体支持物的表面上，任选地其中所述固体支持物用多个接头包被和/或功能化。3.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一分子识别元件和/或第一核酸序列连接(例如共价和/或非共价)于所述接头(例如所述特异性结合对的一个构件)。4.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中所述接头为链霉亲和素和第一分子识别元件为生物素化的分子识别元件，并且第一分子识别元件经由链霉亲和素和生物素的结合而连接于所述固体支持物。5.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中所述接头为链霉亲和素和第一核酸序列为生物素化的，并且第一核酸序列经由链霉亲和素和生物素的结合而连接于所述固体支持物。6.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一核酸序列包含约10、20或25个核苷酸-约30、40、50或60个核苷酸。7.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第二核酸序列包含约20、30、40、50或60个核苷酸-约70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、220、240、260、280或300个核苷酸。8.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第二核酸序列包含与第一核酸序列中的序列(例如约5个或更多个连续核苷酸)基本上相同的序列(例如约5个或更多个连续核苷酸)，任选地其中与第一核酸序列中的序列基本上相同的所述序列存在于第二核酸序列的5'区域中。9.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一核酸序列和/或第二核酸序列包含单链DNA。10.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一核酸序列和/或第二核酸序列包含双链DNA。11.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一核酸序列和/或第二核酸序列为RNA。12.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第一核酸序列和/或第二核酸序列包含一个或多个化学修饰的碱基(例如自然界中通常未发现的一个或多个化学修饰的碱基)，任选地其中所述化学修饰的碱基提高PCR反应的特异性和/或减少核酸序列(例如寡核苷酸)之间的非特异性结合。13.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第二核酸序列共价连接于第二分子识别元件。14.任何一项前述权利要求的试剂盒，其中第二分子识别元件为抗体并且第二核酸序2CN112189139A权利要求书2/4页列连接于所述抗体的一个或多个氨基酸，任选地其中第二核酸序列共价连接于所述抗体的可结晶片段(Fc)区域。15.任何一项前述权利要求的试剂盒，其进一步包含扩增剂(例如反向引物、ssDNA夹板和连接酶等)。16.任何