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本发明公开了一种单分散多孔硅胶色谱填料及其制备方法,包括步骤:将多孔聚合物微球置于低级醇的水溶液中,边搅拌边加入酸性催化剂或碱性催化剂,得A;向A中分步滴加二氧化硅前驱体的低级醇溶液,滴加完后继续反应,得B;过滤B,洗涤、干燥后得聚合物?二氧化硅复合微球;将聚合物?二氧化硅复合微球分步煅烧,去除有机聚合物,得多孔硅胶微球。该硅胶色谱填料粒径可控,粒径尺寸均一,孔径可控,制备时后处理简单,反应条件容易控制。适于大规模生产,能够广泛应用于分析、催化和分离等领域。