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本发明提供一次性检测肺癌多重基因突变的引物探针组合,涉及生物技术领域。该一次性检测肺癌多重基因突变的引物探针组合,包括34条序列EGFR、KRAS、BRAF突变基因的引物和探针。通过使用Taqman探针与数字PCR方法检测测肺癌EGFR、KRAS、BRAF基因突变,标准PCR反应体系经过微滴发生后,分配到约30000个微滴中,每个微滴包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板),实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后含有核酸分子模板的微滴会给出荧光信号,最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,分析软件可计算给出目的分子的浓度或拷贝数,数字PCR平台相对于常规QPCR平台灵敏度高,可通过血液样本进行检测,可以节省组织样本。