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本发明属于动物繁殖与病毒学技术领域,具体涉及一种抗PRRSV的miRNA重组质粒的制备及其应用。发明步骤如下:通过融合PCR制备猪Let?7家族成员ssc?let?7a、ssc?let?7c、ssc?let?7d、ssc?let?7e、ssc?let?7f、ssc?let?7g、ssc?let?7i、ssc?mir?98的重组序列(该重组序列如SEQIDNO:1所示),构建共表达重组质粒pEGFP?N1?Let?7;在细胞水平和活体水平上分别检测重组质粒对PRRSV的抑制作用。本发明为猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的防控和药物、疫苗的制备提供了新的质粒资源。