姬松茸的功效与禁忌姬松茸蛋白制备及分析研究.doc

姬松茸的功效与禁忌姬松茸蛋白制备及分析研究摘要以姬松茸子实体为原料，对姬松茸蛋白的制备工艺进行研究。用碱提酸沉法和酶法，采用4因素3水平L9（34）正交试验确定最佳提取方法和提取工艺；用SDS-PAGE测定蛋白质亚基分子质量分布。结果表明，碱提酸沉法提取的最佳条件为：提取温度30℃，pH值9.5，料液比1∶20，时间1.5h，提取率达26.80%；酶法提取蛋白质的最佳条件为：提取温度40℃，1%的酶液0.6mL，料液比1∶20，时间2.0h，提取率达32.74%。酶法优于碱提酸沉法。姬松茸蛋白质等电点为3.25，主要蛋白质亚基的分子量为81.7kD。关键词姬松茸；蛋白质；制备；碱提酸沉法；酶法TS201.2A1007-5739（xx）03-0349-02StudyonPreperationandAnalysisofAgaricusblazeiMurillProteinWANGZhen1CHANGDing-ran2CHANGMing-chang1SUNChun-you1ZHANGQiong-yu1FENGCui-ping1*（1SchoolofFoodScienceandEngineering，ShanxiAgriculturalUniversity，TaiguShanxi030801；2CollegeofLifeScienceandTechnology，ChinaPharmaceuticalUniversity）AbstractAgaricusblazeiMurillwaschosenastherawmaterial，proteinpreparationprocesswasstudied.Alkaliextraction&acidprecipitationandenzymedigestionwereusedforAgaricusblazeiproteinsextraction，theoptimalextractionprocessingwasdeterminedby4factorsand3levelsorthogonaltest.ThesubunitmolecularweightdistributionofextractedproteinwasanalyzedbySDS-PAGE.Theresultsshowedthattheoptimalextractionconditionofalkalineextraction&acidprecipitationisat30℃，pHvalne9.5，solid-liquidratio1∶20，for1.5hours.Theextractionratereached26.80%.Theoptimalextractionconditionofenzymedigestionis40℃，0.6mLenzymeof1%，solid-liquidratio1∶20，for2.0hours.Theextractionratereached32.74%.TheisoelectricpointofAgaricusblazeiis3.25，andthemolecularweightofmajorproteinsubunitis81.7kD.KeywordsAgaricusblazei；protein；preperation；alkalineextraction&acidprecipitation；enzymedigestion据报道，每100g姬松茸干品含粗蛋白40.50g，可溶性糖类38.45g，粗纤维6～8g，脂肪3.4g，灰分5.7g，是一种含糖质、蛋白质丰富的食用菌[1-2]。目前，对姬松茸的研究大都集中在多糖的研究上[3-5]，姬松茸提取多糖后，下脚料中还含有大量的蛋白质。刘萍[6]采用发酵法，从菌丝体中提取蛋白质，动物试验证明具有显著的抑癌作用。本试验以姬松茸子实体为原料，对碱提酸沉法和酶法提取姬松茸蛋白质的工艺进行研究，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子量，从而为姬松茸蛋白质和多肽的进一步研究和开发提供理论基础。1材料与方法1.1试验材料供试材料：姬松茸（A.blazei）子实体，由山西农业大学食用菌中心提供。主要试剂：蛋白质marker（6.5-200kD），由宝生物工程（大连）有限公司提供；SephadexG-100、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（TEMED），由美国Sigma公司提供；木瓜蛋白酶由北京索莱宝科技有限公司提供；其他试剂均为国产分析纯。1.2试验设计1.2.1碱提酸沉法提取蛋白质最佳工艺条件的确定。在单因素试验基础上，碱提酸沉法以pH值、料液比、温度、时间为因素，采用4因素3水平L9（34）正交试验，确定最佳提取工艺条件。