少动鞘脂单胞菌菌种选育及其胞外多糖的研究.doc

少动鞘脂单胞菌菌种选育及其胞外多糖的研究本论文对少动鞘脂单胞菌及其胞外多糖进行了研究。包括菌种筛选与鉴定，发酵产胞外多糖工艺的研究，菌体形态及分泌胞外多糖电镜研究，发酵动力学研究，紫外诱变菌株及抗生素对生产胞外多糖的影响，胞外多糖的提取、纯化、结构研究，流变性研究等。取得以下一些重要成果：1筛选出一产胞外多糖的菌株S₁，经过系统鉴定，确定该菌为少动鞘脂单胞菌：大小1.4×0.7μm左右。有单极鞭毛的革兰氏阴性杆菌。无芽孢。室温培养（25℃）有鞭毛和动力，37℃培养无鞭毛和动力。部分菌产生鞭毛，且仅在液体培养初期（18小时之前）产生。有聚β-羟丁酸盐。在营养琼脂培养基上培养48小时后，菌落圆整、凸起、有光泽、不透明、呈粘液状。氧化酶、过氧化物酶阳性。精氨酸双水解酶和赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阴性。尿素酶、明胶水解酶阴性。不还原硝酸盐。能水解七叶灵、ONPG、吐温80。非发酵型。42℃不生长。对于红霉素、氯霉素、青霉素和氨苄青霉素敏感，对链霉素和卡那霉素不敏感。2少动鞘脂单胞菌S₁发酵产胞外多糖的工艺为二步发酵法，分为两个阶段，发酵培养基及工艺参数如下：第一阶段，蔗糖10g／LNH₄NO₃0.5g／LKH₂PO₄0.5g／LMnSO₄0.3g／LMgSO₄0.1g／L吐温800.02g／L。pH为7.2，温度为33～35℃。高溶氧。第二阶段，发酵16小时后补加蔗糖40g／L。温度为24～25℃，pH为6.5左右。高溶氧（激烈振荡）。总共发酵时间为72小时3从电镜研究中可以看出，菌体变长是产胞外多糖的前兆。随着发酵时间（＞24小时）增加，聚β-羟丁酸盐在菌体内越来越多。当发酵72小时后，菌体利用底物主要合成聚β-羟丁酸盐。因此到96小时时，聚β-羟丁酸盐几乎占据整个菌体内部。菌体通过四周柱状凸起向外分泌胞外多糖，其中大部分是从菌体两端分泌的。4采用最优化梯度法，对试验数据进行参数估计。得发酵动力学模型为：。