PCR荧光检测试剂盒生产质控作业规程.doc

PCR荧光检测试剂盒生产质量控制规程一.微量加样器使用规定1．微量加样器校正：：使用微量加样器吸10μl10次与否为100μl。2．加样前吸头润湿：当吸头排空时，仍会有某些残留液体以薄膜形式吸附在吸头里面，因此，在加样时先吸打液体多次，充分润湿吸头管腔,以保证加样一致性。3．加样时吸头应靠试管壁：加样时吸头液体顺着管壁流出，防止液滴形成由于其表面张力作用而制止样本释放。4．吸头与否与加样器上吸头套筒密封：样器上吸头与套筒密封完好。5．加样时注意第一停点和第二停点：吸液是应注意大拇指按下按钮至第一停点，缓慢慢慢吸入液体。停留1s，然后将吸头提离液面。用吸纸抹去吸嘴外面也许黏附液滴。放液时通过第一停点，停1-2s后，继续按压到第二停点，排出残存液体。6．PCR反映原液由于有甘油在冷状态较黏稠,易于1次吸取数人份，慢某些。7．边加边看,直观预计,防止跳管。8．低温冷藏批量DNA提取液、PCR反映液A和B取出时与否充分混匀后,分装使用，PCR反映液A和B与否避光低温冷藏和使用。9．配PCR反映液应先加缓冲液再加PCR反映液充分混匀,必要时倒置混匀,再离心,或用灭菌吸头上下吸几次。10．PCR反映液（涉及样品）应充分混匀:保证PCR反映曲线呈S形，全阴性样品呈近似水平曲线。二．PCR实验操作规程程序操作检查操作1混匀办法每一次提示注意倒置混匀、移液器吹打、震荡，50000rpm离心1分钟。2取血清样本1）因水分蒸发变浓2）冻状、混浊按（1）法混匀,再取25µl加水5µl混匀。温水浴37℃溶解按（1）法混匀,或1rpm离心5分钟，取清液。3取质控品冻状、混浊温水浴37℃溶解按（1）法混匀或1rpm离心5分钟，取清液。4血清样本稀释混匀血清阴性血清40µl加阳性血清10µl，按（1）法混匀。5倍稀释5质控品稀释混匀质控品血清稀释液40µl加质控品10µl，按（1）法混匀5倍稀释。6血清样本DNA提取DNA提取液完好血清样本按（1）法混匀，取30µl加DNA提取液60µl，按（1）法混匀，98℃8分钟变性，0℃冷却2-3分钟，1rpm，离心10分钟,吸取上清液。7质控品DNA变性分装，有效，呈清液状态，未重复加热、冻融质控品按（1）法混匀，取30µl5000rpm离心1分钟，98℃5分钟变性,5000rpm，离心1分钟,吸取上清液。8PCR反映液混匀状态取25µl反映液加5µl提取DNA，按（1）法混匀，5000rpm离心1分钟，5000rpm，离心1分钟,吸取上清液。9PCR反映室温10-30℃PCR反映槽四角不放管。10设阴性对照阴性混匀血清CT〉3811阳性参照品各浓度呈梯度以PCRA反映液制作原则曲线，呈直线。12阴性质控品B各浓度呈梯度以PCRA和B反映液制作原则曲线，呈直线。**血清稀释液：全阴性血清再加2倍HBVDNA提取液混匀，5000rpm，离心1分钟，混匀血清98℃5分钟变性,1rpm，离心10分钟,吸取上清液。三.超净工作台使用、维护保养与清洁原则操作规程1.目建立一种超净工作台使用、维护保养与清洁原则操作程序，使操作过程原则化。2.职责质量部QC负责本文献起草，质量部及QC检查人员负责本原则实行。3.范畴本原则合用于超净工作台使用、维护和保养与清洁。4.内容4.1超净工作台重要构成某些：高效过滤器、中效过滤器、通风机、电气控制及排气管道某些。4.2安放点选取：4.2.1应安放于卫生条件较好地方，便于清洁，门窗可以密封以避免外界污染空气对室内影响。4.2.2安放位置应远离有震动及噪音大地方。4.2.3禁止安放在产生大尘粒及气流大地方，以保证操作区空气正常流动。4.3使用前检查：4.3.1接通超净工作台电源。4.3.2旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检查高效过滤器出风面与否有风送出。4.3.3检查照明及紫外设备能否正常运营，如不能正常运营则告知工程部检修。4.3.4工作前必要对工作台周边环境及空气进行超净解决，认真进行清洁工作，并采用紫外线灭菌法进行灭菌解决。4.3.5净化工作区内禁止存储不必要物品，以保持干净气流流动不受干扰。4.4使用：4.4.1使用工作台时，先通过清洁液浸泡纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。4.4.2接通电源，提前50分钟打开紫外灯照射消毒，解决净化工作区内工作台表面积累微生物，30分钟后，关闭紫外灯，启动送风机。4.4.3工作台面上，不要存储不必要物品，以保持工作区内干净气流不受干扰。4.4.4操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。4.4.5最后启动工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。4.4.6每二月用风速计测量一次工作区平均风速，如发现不符合技术原则，应调节调压器手柄，变化风机输入电压，使工作台处在最佳状况。4.4.7每