呼吸道病毒检测的荧光PCR试剂盒及检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115852056A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211563528.0(22)申请日2022.12.07(71)申请人郑州安图生物工程股份有限公司地址450016河南省郑州市经济技术开发区经北一路87号(72)发明人高歌高利飞曹雅倩郑业焕付光宇(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227专利代理师温可睿(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书2页说明书11页序列表（电子公布）附图13页(54)发明名称呼吸道病毒检测的荧光PCR试剂盒及检测方法(57)摘要本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及呼吸道病毒检测的荧光PCR试剂盒及检测方法。本发明构建了检测呼吸道并病毒甲型流感病毒、乙型流感病毒、人副流感病毒I型、人副流感病毒II型、人副流感病毒III型、呼吸道合胞病毒和偏肺病毒的特异性的引物组及探针，通过配套的PCR体系，以熔解曲线和融链温度特征峰为指标实现了单色检测通道完成多种呼吸道病原菌的同时检测，将现有的荧光PCR检测通量增加至少一倍，其成本低，耗时少，极大的提升了检测效率，可广泛用于多病原体混合检测分析，其检测结果可进一步用于辅助临床诊断和治疗。CN115852056ACN115852056A权利要求书1/2页1.检测呼吸道病原菌的引物探针组合，其特征在于，包括：用于检测检测甲型流感病毒的探针A和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；和/或用于检测乙型流感病毒的探针B和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示；和/或用于检测呼吸道合胞病毒的探针C和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示；和/或用于检测副流感病毒1型的探针D和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示；和/或用于检测副流感病毒2型的探针E和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；和/或用于检测副流感病毒3型的探针F和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:12所示；和/或用于检测人偏肺病毒的探针G和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:14所示。2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，还包括用于检测内标的探针H和引物组，所述引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:22所示，下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO:23所示。3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针的5’端连接荧光报告基团，3’端连接荧光淬灭基团；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种，所述荧光淬灭基团选自BHQ1或BHQ2中的任意一种；所述探针A～H中，任意两者为一组，同一组中两个探针的5’端荧光报告基团相同；并且，同一组的两个探针中，任意一种的TM为60～75℃，另外1种探针的Tm值比检测同一呼吸道病原菌的引物组的Tm值低0～30℃。4.根据权利要求1～3任一项所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针A的核苷酸序列如SEQIDNO:15所示；所述探针B的核苷酸序列如SEQIDNO:16所示；所述探针C的核苷酸序列如SEQIDNO:17所示；所述探针D的核苷酸序列如SEQIDNO:18所示；所述探针E的核苷酸序列如SEQIDNO:19所示；所述探针F的核苷酸序列如SEQIDNO:20所示；所述探针G的核苷酸序列如SEQIDNO:21所示；所述探针H的核苷酸序列如SEQIDNO:24所示。5.权利要求1～4任一项所述的引物探针组合在制备呼吸道病原菌检测的试剂盒中的应用。6.呼吸道病原菌检测的试剂盒，其包括权利要求1～4任一项所述的引物探针组合。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、Mn2+溶液、dNTPs溶液和rTth聚合酶中的至少一项。2CN115852056A权利要求书2/2页8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应缓冲液的成分包括100mMTricine、200mMKOAC和体积分数为0.1‰～1‰的NaN3；所述Mn2+溶液的溶剂为水，其中Mn2+的使用浓