一种丝状真菌的荧光融合蛋白原位表达的基因方法及其应用.pdf
一条****丹淑
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一种丝状真菌的荧光融合蛋白原位表达的基因方法及其应用.pdf
本发明公开了一种丝状真菌的荧光融合蛋白原位表达的基因方法及其应用。属于分子生物学和生物技术领域;具体步骤:1、荧光蛋白载体构建;2、荧光融合蛋白原位表达质粒的构建;3、真菌转化构建重组菌株;并且叙述了本发明在真菌蛋白检测(荧光融合蛋白共聚焦成像和荧光融合蛋白定量分析)中的应用。本发明通过农杆菌介导的同源重组基因操作手段在真菌目的基因3’端原位连接一个荧光蛋白基因,使目的基因和荧光蛋白基因以融合蛋白(目的蛋白?荧光蛋白)的形式共表达;通过荧光观察分析目的蛋白亚细胞定位和量化其表达量;本发明中公开的真菌荧光融
一种融合蛋白基因及其应用.pdf
本发明提供了一种融合蛋白基因及其应用,由分泌信号肽基因、猪的CTLA4基因、猪流行性腹泻病毒抗原性蛋白基因、猪A群轮状病毒抗原性蛋白基因和猪急性腹泻综合症病毒抗原性蛋白基因连接而成的融合蛋白基因CTLA4‑PEDVS‑PoRVP6‑SADSVS;再将融合蛋白基因克隆到pDC316载体的EcoRI和XhoI酶切位点之间,与腺病毒骨架载体pBHGlox_1,3cre进行体外重组,转染Hek293细胞,等细胞病变收集细胞,细胞裂解后的上清纯化产物得到重组载体rAd‑CTLA4‑PEDVS‑PoRVP6‑SADS
一种融合基因原位检测方法、试剂盒及其应用.pdf
本发明提供了一种融合基因原位检测方法及其试剂盒,所述方法包括:通透细胞;基因组DNA的平末端处理,暴露平末端;暴露融合基因DNA;探针锁定;信号放大;信号检测。本发明还提供了所述融合基因原位检测方法及其试剂盒在癌细胞重排融合基因检测中的应用。本发明的有益的技术效果在于所提供的方法无需核酸提取,细胞用量少;特异性的探针放大目标信号,灵敏度高;对细胞核进行原位检测,鉴定基因位置变化从而确定是否发生基因融合。本发明提供的方法可以用于所有实体肿瘤中人ETV6‑NTRK3融合基因的检测,具有广泛适用性的优点。
一种用于肿瘤融合基因荧光原位杂交检测的质控品及其制备方法.pdf
本发明提供一种用于肿瘤融合基因荧光原位杂交检测的质控品的制备方法,所述的制备方法中包括融合基因的编辑,所述的融合基因的编辑中包括:(1)在参与融合的两个基因的预期断点附近各设计一条sgRNA;(2)设计一个重组AAV载体使两处断裂的DNA发生同源重组修复。本发明的FISH质控品通过基因编辑获得融合序列与预期完全一致的融合基因细胞系作为原料,具有可稳定重复生产、可确保质控品均匀性和一致性的优点,避免临床样本或购买天然携带融合基因的细胞系作为质控品的缺陷。
一种丝状真菌外泌体提取方法及其应用.pdf
本发明属于生物技术领域,本发明公开了一种丝状真菌外泌体的提取方法;该方法包括如下步骤:用LNAAM培养基发酵丝状真菌,得到含有此丝状真菌外泌体的发酵液;将此发酵液去除菌丝,然后进行高速离心去除不溶性杂质,保留上清;接着使用超滤离心管进行低温超滤浓缩,使用适量PBS溶液清洗浓缩液三次;然后使用外泌体纯化柱进行纯化;最后使用0.22μm过滤器进行过滤除菌即得到真菌外泌体;该方法可快速高效地从丝状真菌发酵液中提取到高纯度、高浓度的外泌体;同时,本发明还公开了一种丝状真菌外泌体在线虫生物防治领域的应用。