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本发明涉及一种人胎膜组织单细胞快速解离试剂盒、解离方法及应用。所述人胎膜组织单细胞快速解离试剂盒包括如下组分:酶I、酶II、组合酶、稀释缓冲液、中和缓冲液、洗涤缓冲液和3×红细胞裂解缓冲液。本发明所述解离方法先将胎膜组织通过解剖分离为羊膜和绒毛?膜蜕膜两部分,再采用单一酶和组合酶相结合的方式进行同步且独立的酶解,相比其他酶解方式(对比例1~5)不仅显著提升了效率,将解离时间由6h缩短至70min,还在细胞活率、活细胞浓度和结团率上明显占优。即大大降低实验成本的同时还提高了实验的准确性和效率。