一种25-羟基维生素D解离液、检测方法、应用及试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115774112A(43)申请公布日2023.03.10(21)申请号202310091432.7(22)申请日2023.02.10(71)申请人可孚医疗科技股份有限公司地址410000湖南省长沙市雨花区振华路816号(72)发明人杨海霞周迪姜扬帆刘丽霞(74)专利代理机构长沙正奇专利事务所有限责任公司43113专利代理师郭立中凡凤(51)Int.Cl.G01N33/82(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图1页(54)发明名称一种25-羟基维生素D解离液、检测方法、应用及试剂盒(57)摘要本发明涉及到免疫层析检测技术领域，尤其是涉及到一种25‑羟基维生素D解离液、检测方法、应用及试剂盒。所述25‑羟基维生素D解离液，包括4‑8份盐酸胍和2‑4份碳酸丙烯酯，其pH为7.0~9.0。在25‑羟基维生素D解离过程中，盐酸胍通过形成和解离蛋白结构中的肽键使得VDBP蛋白发生随机卷曲，使得蛋白质失去其活性结构，发生可逆性变性。而碳酸丙烯酯的极性结构使得肽键解离之后的各部分氨基酸残基发生松散现象，使得盐酸胍的解离效果更加充分，解离所需时间更短。二者协同作用，提高解离效率。本发明提供的检测试剂盒，操作简单、价格更加低廉，与酶联免疫法相比灵敏度和特异性更高。CN115774112ACN115774112A权利要求书1/1页1.一种25‑羟基维生素D解离液，其特征在于，按重量份计，包括4‑8份盐酸胍和2‑4份碳酸丙烯酯，其pH为7.0~9.0。2.根据权利要求1所述的25‑羟基维生素D解离液，其特征在于，还包括0.24份‑0.73份Tris缓冲液、1‑3份壬基酚聚氧乙烯醚、0.1‑2份三（2‑羧乙基）膦、0.1‑2份二乙烯三胺五乙酸五钠。3.一种25‑羟基维生素D的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：a、取如权利要求1或2所述的25‑羟基维生素D解离液与全血样本混匀，震荡1‑3min后加入稀释液，混匀得到样本；b、取样本滴入到25‑羟基维生素D检测试剂卡上，反应时间为10‑15min；c、将试剂卡放入荧光免疫分析仪中进行检测，并读取数据，通过荧光强度得出25‑羟基维生素D的含量。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液，按重量份计，包括0.24份‑0.73份Tris缓冲液、0.5‑3份C13‑15醇聚氧乙烯醚、0.1‑2份Tetronic1307、0.02‑1份Proclin300、0.2‑2份TX‑100，pH为7.4~8.8。5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述25‑羟基维生素D检测试剂卡包括硝酸纤维素膜和结合垫；所述硝酸纤维素膜上含有T线和C线；所述T线通过将T线包被物喷涂于硝酸纤维素膜上加工而成，所述C线通过将C线包被物喷涂于硝酸纤维素膜上加工而成。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，T线包被物包括Tris缓冲液、海藻糖、BSA和抗25‑羟基维生素D抗体蛋白；C线包被物包括Tris缓冲液、海藻糖、BSA和羊抗鼠IgG抗体蛋白。7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述结合垫喷涂有荧光标记物，所述荧光标记物包括时间分辨荧光微球标记的抗25‑羟基维生素D抗体蛋白、时间分辨荧光微球标记鼠IgG蛋白。8.如权利要求1或2所述的25‑羟基维生素D解离液在解离或者检测25‑羟基维生素D中的应用。9.如权利要求1或2所述的25‑羟基维生素D解离液在制备解离或者检测25‑羟基维生素D的试剂中的应用。10.一种解离或者检测25‑羟基维生素D试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1或2所述的25‑羟基维生素D解离液。2CN115774112A说明书1/12页一种25‑羟基维生素D解离液、检测方法、应用及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及到免疫层析检测技术领域，尤其是涉及到一种25‑羟基维生素D解离液、检测方法、应用及试剂盒。背景技术[0002]普遍认为血清25‑羟基维生素D的高低可以反映维生素D的储存水平，并与维生素D缺乏的临床症状相关，因此25‑羟基维生素D是维生素D缺乏临床症状的早期诊断的主要依据。而血清中的25‑羟基维生素D主要与25‑羟基维生素D结合蛋白(VDBP)结合，要检测25－羟基维生素D首先需要的就是解离。把25‑羟基维生素D从VDPB中解离出来。[0003]解离液首先将25‑羟基维生素D从25‑羟基维生素D结合蛋白中解离出来，目前VD解离方法有以下几种，但都具有相应的技术缺陷。[0004]（1）强酸强碱法，通过过高或者过低的pH值，使维生素D结合蛋白变性或者发生构象的变化，从而失去与维生素D的结合能力，释放出来，但该方法获取的维生素D缓冲液由于p