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本发明公开了一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法,主要是通过酶I和酶II两次消化处理后,结合过滤、离心清洗以及红细胞裂解等操作获得纯化后的单细胞悬液。所述酶I为含0.25%胰蛋白酶的HBSS培养基;所述酶II为含中性蛋白酶0.2mg/mL、II型胶原酶1~3mg/mL、IV型胶原酶1~3mg/mL、DNaseI0.1mg/mL和CaCl20.04~0.06mg/L的HBSS培养基。本发明优点包括:操作简便,无需特殊仪器设备即可实现,可于短时间内获得高活性的肾脏单细胞悬液,经细胞活性检测发现,经最适酶浓度所分离得到的肾脏单细胞产量高达1.6×106/mL,活率高达89.3%。