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本发明提供一种新型的生物素交联剂、应用及其制备方法,所述生物素交联剂为6?(生物素酰胺)己酸基琥珀酰亚胺酯磺酸钠盐,所述制备方法包括如下步骤:步骤S1,使生物素与N?羟基琥珀酰亚胺发生缩合反应,生成生物素?N?琥珀酰亚胺基酯;步骤S2,使所述生物素?N?琥珀酰亚胺基酯与6?氨基己酸反应生成生物素氨基己酸;步骤S3,使所述生物素氨基己酸与N?羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐发生缩合反应,生成6?(生物素酰胺)己酸基琥珀酰亚胺酯磺酸钠盐。根据本发明实施例的生物素交联剂的制备方法,合成路线简单、反应条件温和、操作简便、成本低、产率高、易于工业化生产;该生物素交联剂是一种水溶性的生物素交联剂,可以用于肿瘤治疗用药物靶向性修饰。