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本发明属于人呼吸道病原体生物检测技术领域,公开了一种同时检测7种型别腺病毒的荧光定量PCR检测试剂盒。该试剂盒引物是由感染人呼吸道7种型别腺病毒高保守区设计。实现了单管单重PCR即可同时检测感染人呼吸道的7种型别腺病毒,且不会受其它感染人类肠道腺病毒型别及其它微生物序列影响,保证高覆盖度、高灵敏性、高特异性和高准确性。对上述7种型别腺病毒建立进化树模型及亲缘关系分析,进行待检片段特异性和敏感性评估后,挑选五联体蛋白对应基因序列作引物结合位点。本试剂盒覆盖型别广,利用熔解曲线染料法,使检测效率、特异性、敏感性、经济型、便捷性,相比于常规的单管多重或多管单重检测显著提高。