分子诊断技术在结核病诊治中的应用.ppt

分子诊断技术在结核病诊治中的应用全球结核病流行状况全球结核病流行状况全球结核病流行状况全球结核病流行状况全球结核病流行状况全球结核病流行状况结核病诊治中存在的问题根据不同分子水平及技术特点来选择诊断检测体系Sputum分子诊断适宜技术的选择全血IFN-γ释放分析技术(IGRA)由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丢失该基因序列绝大多数的环境分枝杆菌也不存在RD1区PlamaPBMCsGelBarrierErythrocytes结果判断图潜伏性结核（LTBI）诊断技术比较核酸扩增技术二、SAT技术TB-SAT操作步骤三、MTBC-鉴定MTB复合群(TMA技术)MTD技术特点MTD结核分枝杆菌检测技术特点MTD结核分枝杆菌的直接检测意义DNA作为临床分子诊断靶标四、MTBDRplus-鉴定MDR抗结核药物MTBDRplus技术路线结果解释方法MTBDRplus技术性能参数WHO、盖茨基金会推荐使用的快速线性探针技术，可以在6小时内给出药敏鉴定结果可以做一线结核药物（异烟肼利福平）、二线结核药物的耐药检测（乙胺丁醇、氟喹诺酮类药物、可注射结核药物）标本可是涂片阳性的痰标本，或是培养物技术步骤简单：核酸提取、PCR扩增、核酸杂交仪检测每个试剂条上自带质控：CC杂交质控、AC扩增质控、TUB结核分枝杆菌质控，确保整个实验流程的可信度五、交叉引物恒温扩增技术(CrossPrimingAmplification,CPA)CPA技术原理图CPA技术路线图结果的判读CPA技术性能参数六、环介导恒温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP)LAMP技术原理动画图LAMP方法建立阶段所需的试剂LAMP技术结果判读原理图扩增反应在等温条件（60～65℃）下连续进行⇒可以使用简便、廉价的扩增装置扩增效率高、可在短时间内完成扩增⇒可在短时间内得出结果有非常高的特异性⇒可得出“扩增反应发生=有目的菌存在”的结论产生大量扩增产物，检测方法简便⇒无需用电泳、特殊探针等，可通过浊度仪、荧光目视方法确认扩增结果从扩增到检测可在1个反应试管内（封闭系统）完成⇒可防止由于扩增产物产生的污染从RNA经一步反应可完成扩增⇒无需另外进行逆转录反应LAMP技术的应用领域LAMP技术性能参数七、DNA微阵列（基因芯片）技术基因芯片技术操作流程分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（DNA微阵列芯片法）同时快速检测17种分枝杆菌：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓肿、草、不色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍及耻垢。分离株或者痰样本均可检测。通量：同时检测17种分枝杆菌速度：6小时versus传统4周灵敏度：103CFU/反应特异性：防污染体系；对照设计严谨；自动判读结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒（DNA微阵列芯片法）基于rpoB/katG/inhA的基因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核分枝杆菌多药耐药（利福平、异烟肼）通量：两种一线抗结核药物、8个突变位点速度：6小时versus传统4~8周灵敏度：103CFU/反应特异性：防污染体系；对照设计严谨；自动判读基因芯片技术性能参数各项技术比较各项技术比较ThankYou!