现代检验技术在结核病临床诊断中的应用.docx

现代检验技术在结核病临床诊断中的应用【中图分类号】R521【文献标识码】A【文章编号】1003-8183（2013）11-0088-03由于感染结核分枝杆菌（mycobacteriumtuberculosisMTB）而导致的结核病（tuberculosisTB）在全世界范围内仍是严重威胁人民生命和健康的公共卫生问题2011年底世界卫生组织公布2010年全球新发结核病患者约880万例每年全球死于结核病的人数均有逾百万之巨在全球感染性疾病导致死亡人数中位居第二。我国每年约有25万余人死于结核病是其他传染病导致死亡人数的总和的两倍20世纪90年代后结核杆菌耐药性的出现更使全球的结核病疫情呈回升的趋势。结核分枝杆菌生长缓慢无运动能力其最快分裂增殖速度为18小时一代而大多数细菌都是几分钟或几十分钟便繁殖一代结核分枝杆菌易产生耐药性其耐药可由自发突变产生（原发性耐药）或由用药不当经突变选择产生（继发性耐药）多重耐药性的产生主要可能是由于后者所导致。结核分枝杆菌的生物学特性导致其检验方法的局限性目前用于检测结核分枝杆菌及耐药菌株的方法有很多但大部分都存在灵敏度低、需时较长的缺陷无法满足现代临床及时快速诊治的需求因此如何快速、准确的检测结核杆菌尤其是对现代分子生物学的迅猛发展以及对结核分支杆菌分子遗传学的深入研究催生了一系列新的检验技术在结核杆菌临床检测中的应用本文将就近年来国内外在结核分枝杆菌及耐药菌株的临床检测方面的有关研究做简要综述。1细菌学检测方法细菌培养法对结核分枝杆菌进行分离、鉴定和药物敏感性试验。结核杆菌的培养在结核病的诊断、流行病学指标、分型鉴定、药敏试验、结核病药物的研究等方面依然是不可替代。目前最主要使用的分离鉴别培养基有改良罗氏培养基、L-J培养基、Middlebrook系列培养基等。1.1全自动分支杆菌检测系统（BACTEC）由BD公司研发的全自动分支杆菌培养鉴定仪BACTEC检测系统是以Middlebrood系列培养基为基础该系列培养基是国外最常用于结核杆菌研究和诊断目的的培养基之一具有培养基成分多、配制复杂[2]但培养时间短的特点。早期的BACTEC检测系统如BACTEC460TMTB是通过在培养基中加入标记14C的棕榈酸当有分枝杆菌生长时细菌的代谢产生有放射性14CO2然后由配套的放射信号监测系统检测其含量非常敏感但因存在易污染、放射性危害等缺点已逐渐被淘汰。BD公司新推出的无放射性污染的BACTEC9000MB及BACTECMGIT960其中BACTECMGIT960是以Middlebrood7H9培养基为基础加入BBLPANTATM抗菌剂和OADC营养剂并采用荧光物质作为分枝杆菌生长指示剂指示剂在有氧条件下发生荧光淬灭当培养基中分枝杆菌生长逐渐消耗氧时指示剂发出橙色荧光可通过紫外线透射仪观察故也称为分枝杆菌生长指示管法（mycobacteriagrowthindicatortubeMGIT）是目前最快的分枝杆菌培养、鉴定、药敏系统平均检出时间为14.4天最快10天[3-5]阳性率为82.5%-94%[6]适用于多种标本来源对各种分枝杆菌检测都适用。但价格昂贵目前绝大多数基层医疗机构不具备开展该技术的条件。1.2变色液体培养基快速检测法变色液体培养基的主要成分包括磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、微量元素、甘油、马血清、变色剂、甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘霉素B、两性霉素B、萘啶酸等营养丰富液体培养基更有利于细菌生长当有活得分支杆菌生长消耗培养基中的氧再通过分支杆菌氧化还原系统使培养基中的无色噻唑兰还原成红色或紫红色不溶于水的物质并以颗粒形式分泌至细胞表面其他细菌及真菌受前处理或抗生素的作用不能在培养基中生长培养基不发生颜色的变化。实验表明变色液体培养基法与L-J培养法相比较L-J培养基细菌生长天数平均为26d变色液体培养基平均为10d变色液体培养基测定药敏试验结果时间为2-6dL-J培养基为28d左右[7]。变色液体培养基具有简便、快速、经济实用的特点且不需特殊仪器适合基层结核菌实验室的分离、鉴定培养和耐药性试验但也有其局限性：阳性率依靠标本中分枝杆菌的数量、标本的收集方法及病人的因素如正在使用抗分枝杆菌药物的治疗等；前处理方法只能用2%-4%的NALC-NaOH消化；部分分枝杆菌产生颜色变化后长时间继续培养有褪色现象。2免疫学检测方法结核病患者存在细胞免疫与体液免疫分离的现象即细胞免疫随病情加重而减弱体液免疫随病情加重而增强结核菌还具有抗原性较弱且属间和种间有共同抗原决定簇的存在故目前已商品化的组合抗原检测试剂盒