中药成分测定方法.ppt

中药成分测定方法第一节含量测定目标与意义第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理⒉键合相硅胶：十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是惯用固体萃取剂，其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水溶性杂质或成份。也惯用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药品。该类LSE普通操作程序为：1)柱活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5毫升水洗去柱中甲醇。2)上样。3)清洗。用2～5ml水清洗以除去弱保留亲水成份，如无机盐、氨基酸、亲水蛋白质、糖以及中等保留成份极性化合物、低肽等。4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子肽、甾体、较亲脂药品等强保留待测组分。⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型极性丙烯酰胺聚合物;非极性苯乙烯和二乙烯苯共聚物.其吸附性质与烷基键合相硅胶相同，经过疏水作用对非极性水溶性成份有吸附力。比如在测定复方归芪剂中黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性多糖杂质，再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂主要特点是表面主动大，传质速率较高和含有不一样极性及适于吸附较大分子。树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药品，操作程序类似ODS填料。第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理⒍离子交换树脂：憎水基质离子交换树脂兼有离子交换剂及大孔树脂一些性质，所以对于在水中溶解度不大药品、洗脱剂中需含一定量有机溶剂。离子交换树脂柱可用于除去样品中离子，预防组分分解，更惯用于萃取样品液中可离解化合物。第二节含量测定样品处理（五）消化法对样品进行有机破坏，惯用于中药制剂中重金属检验。惯用破坏方法有湿法消化和干法消化法。⒈湿法消化：依据所用试剂不一样，下面介绍三种常见消化方法。（1）硝酸—高氯酸法该法破坏能力强，反应较激烈，故进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中溶液蒸干，以免发生爆炸。本法适合用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂破坏，经破坏后所得无机金属离子均为高价态，本法对含氮杂环类有机物破坏不够完全。（2）硝酸—硫酸法该法适合用于大多数有机物质破坏，无机金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐金属离子测定，不宜采有此法。第二节含量测定样品处理第二节含量测定样品处理第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法2、薄层荧光扫描法基本原理：F=2.3K’I。ECL或F=KC光源：氙灯或汞灯。灵敏度：最低可测到10-50pg。适用范围：适合于本身含有荧光或经过适当处理后可产生荧光物质测定。Kubelka-Munk理论不适合用于薄层荧光扫描，无需进行曲线校直。用薄层荧光扫描进行定量分析时，用斑点荧光强度积分值（色谱峰峰面积）与斑点中组分含量代替上式中F与C进行运算。（二）薄层色谱规范化操作1、仪器与材料①薄层板；②涂布器；③点样器材；④展开箱（层析缸）⑤显色与检测仪器2、操作方法①薄层板制备；②点样；③展开；④检测；第三节惯用定量分析方法（1）工作曲线①检验所选择散射参数SX值是否适宜。SX值适宜则工作曲线被校直为直线，不然，调整SX值再校正，直至在一定点样量范围内工作曲线成直线为止。②考查工作曲线是否过原点，方便确定采取一点法或二点法定量。③确定点样量线性范围。既使采取曲线校直，也只是在一定点样量范围内工作曲线为直线，所以需确定点样量上、下限。为降低定量误差，最好调整点样量，使供试品与对照品峰面积相靠近。为了克服薄层板间差异，外标法及内标法均应采取随行标准法，即标准溶液与供试品溶液交叉点在同一块薄层板上。第三节惯用定量分析方法第三节惯用定量分析方法（4）统计检验统计检验是检验两种方法、两台仪器或两个人测量两组试验数据精密度或准确度（偶然误差或系统误差）间是否存在显著性差异，说明新建定量方法可否代替旧方法或优于旧方法。统计检验包含F检验与t检验。F检验即精密度差异检验，用以检验两组数据精密度或偶然误差是否存在显著性差异，普通为单侧检验。t检验即准确度差异检验，用以检验两组测量数据平均值或系统误差是否存在显著性差异。若t检验证实两种方法测得均值不存在显著性差异时，则新方法能够代替旧方法，t检验普通为双侧检验。t检验与F检验详细方法参见分析化学相关论著，此从略。第三节惯用定量分析方法②外标二点法工作曲线不经过原点时，只能用外标二点法定量，最少需点二种不一样浓度标准溶液（或一个浓度两种点样量），才能决定一直线,其计算公式为：