中药成分测定方法.ppt

第四章中药的含量测定第一节含量测定的目的与意义第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理⒉键合相硅胶：十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取剂，其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药物。该类LSE的一般操作程序为：1)柱的活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5毫升水洗去柱中的甲醇。2)上样。3)清洗。用2～5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、低肽等。4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂的药物等强保留的待测组分。⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型极性丙烯酰胺聚合物;非极性苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表面积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附较大分子。树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药物，操作程序类似ODS填料。第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理⒍离子交换树脂：憎水基质的离子交换树脂兼有离子交换剂及大孔树脂的一些性质，所以对于在水中溶解度不大的药物、洗脱剂中需含一定量的有机溶剂。离子交换树脂柱可用于除去样品中的离子，防止组分分解，更常用于萃取样品液中可离解化合物。第二节含量测定样品的处理（五）消化法对样品进行有机破坏，常用于中药制剂中重金属的检查。常用的破坏方法有湿法消化和干法消化法。⒈湿法消化：根据所用试剂不同，下面介绍三种常见的消化方法。（1）硝酸—高氯酸法该法破坏能力强，反应较激烈，故进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的溶液蒸干，以免发生爆炸。本法适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机金属离子均为高价态，本法对含氮杂环类有机物破坏不够完全。（2）硝酸—硫酸法该法适用于大多数有机物质的破坏，无机金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。第二节含量测定样品的处理第二节含量测定样品的处理第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法2、薄层荧光扫描法基本原理：F=2.3K’I。ECL或F=KC光源：氙灯或汞灯。灵敏度：最低可测到10-50pg。适用范围：适合于本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的物质的测定。Kubelka-Munk理论不适用于薄层荧光扫描，无需进行曲线校直。用薄层荧光扫描进行定量分析时，用斑点荧光强度的积分值（色谱峰峰面积）与斑点中组分的含量代替上式中F与C进行运算。（二）薄层色谱的规范化操作1、仪器与材料①薄层板；②涂布器；③点样器材；④展开箱（层析缸）⑤显色与检测仪器2、操作方法①薄层板的制备；②点样；③展开；④检测；第三节常用定量分析方法（1）工作曲线①检查所选择的散射参数SX值是否适宜。SX值适宜则工作曲线被校直为直线，否则，调整SX值再校正，直至在一定点样量范围内工作曲线成直线为止。②考察工作曲线是否过原点，以便确定采用一点法或二点法定量。③确定点样量的线性范围。既使采用曲线校直，也只是在一定点样量范围内工作曲线为直线，因此需确定点样量的上、下限。为降低定量误差，最好调整点样量，使供试品与对照品的峰面积相接近。为了克服薄层板间差异，外标法及内标法均应采用随行标准法，即标准溶液与供试品溶液交叉点在同一块薄层板上。第三节常用定量分析方法第三节常用定量分析方法（4）统计检验统计检验是检验两种方法、两台仪器或两个人测量的两组实验数据的精密度或准确度（偶然误差或系统误差）间是否存在显著性差异，说明新建定量方法可否代替旧方法或优于旧方法。统计检验包括F检验与t检验。F检验即精密度差别检验，用以检验两组数据的精密度或偶然误差是否存在显著性差异，一般为单侧检验。t检验即准确度差别检验，用以检验两组测量数据的平均值或系统误差是否存在显著性差异。若t检验证明两种方法测得的均值不存在显著性差异时，则新方法可以代替旧方法，t检验一般为双侧检验。t检验与F检验的具体方法参见分析化学的有关论著，此从略。第三节常用定量分析方法②外标二点法工作曲线不通过原点时