

实时荧光定量PCR技术原理与应用研究.docx
胜利****实阿
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实时荧光定量PCR技术原理与应用研究李洪春1,2*江苏徐州,徐州医科大学医学技术学院,221000;2.江苏徐州,徐州医科大学附属医院检验科,221000【摘要】:实时荧光定量PCR技术是普通聚合酶链式反应技术基础上演变起来,一种灵敏度较高的核算定量技术。与常规PCR相比,它的不同之处在于其根据PCR产物中莹光信号的强度定量,不仅提高了反应的特异性和自动化程度,而且有效解决PCR污染等问题,实现了检测质量的飞跃.当前已经被广泛应用于医学诊断和环境监测多种领域的研究,本文对实时荧光定量PCR的原理,分类以及
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实时荧光定量PCR技术的原理及应用在PCR扩增反应结束之后,可对扩增产物进行定性和定量的分析。但是无论定性还是定量分析,分析的都是PCR终产物。但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经PCR扩增之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量PCR技术应运而生。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出,实现了PCR从定性到定量的飞跃。1.实时荧光定量PCR技术的基本原理在实时荧光定量PCR反应中
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提纲:实时荧光定量PCR定义:与普通PCR的区别定量PCR的数学原理斜率与扩增效率荧光定量PCR化学原理1、SYBRGreen法SYBRGreen熔解曲线分析SYBRGreen法优缺点2、TaqMan探针法TaqMan作用机理TaqMan法优缺点Real-timePCR方法应用•绝对定量(AbsoluteQuantification,AQ)病原体检测转基因食品检测基因表达研究•相对定量(RelativeQuantification,RQ)基因在不同组织中的表达差异药物疗效考核耐药性研究绝对定量与相对定量