HE染色步骤.doc

HE染色步骤HE染色步骤HE染色步骤常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ)5—10min（2）二甲苯（Ⅱ）5—10min(3)95％乙醇（Ⅰ）1—3min（4)95％乙醇（Ⅱ）1—3min（5）80%乙醇1min(6）蒸馏水1min(7）苏木精液染色5-15min(8）流水稍洗去苏木精液1—3s（9)1%盐酸乙醇1-3s(10)稍水洗10—30s（11）促蓝液返蓝10-30s(12）流水冲洗10—15min（13)蒸馏水过洗1—2s（14)0。5％曙红液染色1-3min(15）蒸馏水稍洗1-2s(16)80%乙醇稍洗1-2s（17)95%乙醇(Ⅰ)3-5min（18)95％乙醇（Ⅱ）3-5min(19)无水乙醇5-10min（20)无水乙醇5—10min(21）二甲苯（Ⅰ）3—5min（22）二甲苯（Ⅱ）2—5min(23）二甲苯（Ⅲ）3-5min(24）中性树胶封固结果:细胞浆红色，细胞核蓝紫色.转：常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ）5—10min（2）二甲苯(Ⅱ）5-10min（3)95％乙醇(Ⅰ）1-3min（4)95％乙醇（Ⅱ）1—3min（5）80%乙醇1min（6）蒸馏水1min（7）苏木精液染色5-15min（8）流水稍洗去苏木精液1-3s（9）1％盐酸乙醇1-3s(12)流水冲洗20-30min(13）蒸馏水过洗1-2s（14)0.5％曙红液染色1-3min(15)蒸馏水稍洗1-2s(16）80%乙醇稍洗1-2s(17）95％乙醇（Ⅰ）2—3s(18）95％乙醇（Ⅱ）3—5s（19)无水乙醇5—10min（20）石炭酸二甲苯无水乙醇5-10min（21)二甲苯（Ⅰ)2min（22）二甲苯（Ⅱ）2min(23）二甲苯(Ⅲ)2min(24）中性树胶封固注：①第（10)、（11)步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min.②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋,4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。（各两次，然后把水吸干）3．苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水）4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。5．自来水浸泡15min或温水(约50℃）5min。（吸干水）6．置伊红液2min。7．常规脱水，透明，封片：95%乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇(I)1min→100%乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1)1min(省略）→二甲苯（I)1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。HE染色步骤一、HE染液的配制:1、Harris苏木素:称取苏木素精1g一氧化汞0。5g硫酸铝钾20g量取无水乙醇10ml蒸馏水200ml苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸,离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存.使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴)。2、0。5%伊红(水溶性)：称取伊红0.5g量取95%乙醇25ml蒸馏水75ml先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存.3、1%盐酸水溶液：盐酸3ml蒸馏水297ml混匀,白色试剂瓶保存.4、中性树胶封片剂:往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可.试剂二甲苯1瓶Harris苏木素染液无水乙醇2瓶1%盐酸水溶液95％乙醇2瓶0.5%伊红(水溶性)染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、入二甲苯(I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、入二甲苯（II)中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体;4、入100％乙醇(I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体;6、入95％乙醇3分钟;7、入流水2分钟,用吸水纸吸干水分;8、Harris苏木素染色4~8分钟;9、自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红);11、自来水洗返蓝15~30分钟；12、0.5％伊红（水溶性）染色30秒～1分13、95％乙醇(I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体;14、95%乙醇（II）5分钟,用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体;16、入100%乙醇(II）2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体;18、入二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶封片。20、镜下观察结果：细胞核深蓝色,胞浆及纤维组